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[交流]
逆轉(zhuǎn)錄相關(guān)
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| 只知道有實時熒光定量PCR，不知道逆轉(zhuǎn)錄PCR是怎么一回事，是先逆轉(zhuǎn)錄后再做實時熒光定量PCR嗎？可是如果是這樣，要怎么確定樣本中的mRNA中的含量呀？怎么轉(zhuǎn)換一下呢？沒有做過逆轉(zhuǎn)錄，請指教！ |
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aq7068
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反轉(zhuǎn)錄，是在隨機引物或特異的引物的引導(dǎo)下反轉(zhuǎn)錄酶沿著mRNA單鏈合成互補的cDNA序列 熒光Pcr用的酶只能以DNA鏈為模版延伸擴增 也可以用一部法將兩個酶加在一個反應(yīng)管，但是會影響到擴增效率。 mRNA的表達量可以用絕對定量和相對定量測得 相對定量需要內(nèi)參，絕對定量需要標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線  發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2019-05-22 20:04:09
去大西南
新蟲 (初入文壇)
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總RNA提完后先測濃度，根據(jù)濃度把RNA定量到1μg，然后去除基因組DNA，接著逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，最后才是熒光定量PCR 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2019-05-23 10:08:24
4樓2019-12-23 10:34:55
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