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酵母ROS
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我最近在做酵母的，ROS用的是碧云天的試劑盒，DCFH-DA法，流式細胞儀測定，但是測定下來發(fā)現(xiàn)，每一組樣品，包括陽性對照組的ROS含量都很低，感覺染料沒有染上，操作步驟如下： 1.取樣100微升，用PBS洗滌兩次 2.加入1 mL提前稀釋好的DCFH-DA（提前用PBS稀釋，至濃度10 µmol/L），重懸，細胞濃度為1*106cfu/mL，（OD600約0.1~0.2之間） 3.37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)25 min，每隔4 min，對細胞上下顛倒一次，使得染液與細胞充分接觸 4.細胞被熒光染料充分標記后，離心，PBS洗1~2次，（將未進入細胞的熒光染料去除）收集沉淀，用PBS重懸，加入流式管中，等待檢測 5.流式檢測用FLI通道，488nm激發(fā)，發(fā)射波長525 nm，檢測各樣品熒光強度。 一直找不到合適的原因，請大神賜教，萬分感謝！ |
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6樓2019-08-07 12:22:24
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