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[求助]
酵母ROS
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我最近在做酵母的，ROS用的是碧云天的試劑盒，DCFH-DA法，流式細(xì)胞儀測定，但是測定下來發(fā)現(xiàn)，每一組樣品，包括陽性對(duì)照組的ROS含量都很低，感覺染料沒有染上，操作步驟如下： 1.取樣100微升，用PBS洗滌兩次 2.加入1 mL提前稀釋好的DCFH-DA（提前用PBS稀釋，至濃度10 µmol/L），重懸，細(xì)胞濃度為1*106cfu/mL，（OD600約0.1~0.2之間） 3.37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)25 min，每隔4 min，對(duì)細(xì)胞上下顛倒一次，使得染液與細(xì)胞充分接觸 4.細(xì)胞被熒光染料充分標(biāo)記后，離心，PBS洗1~2次，（將未進(jìn)入細(xì)胞的熒光染料去除）收集沉淀，用PBS重懸，加入流式管中，等待檢測 5.流式檢測用FLI通道，488nm激發(fā)，發(fā)射波長525 nm，檢測各樣品熒光強(qiáng)度。 一直找不到合適的原因，請大神賜教，萬分感謝！ |
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