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dreamer夢(mèng)鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
酵母ROS
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我最近在做酵母的,ROS用的是碧云天的試劑盒,DCFH-DA法,流式細(xì)胞儀測(cè)定,但是測(cè)定下來(lái)發(fā)現(xiàn),每一組樣品,包括陽(yáng)性對(duì)照組的ROS含量都很低,感覺(jué)染料沒(méi)有染上,操作步驟如下: 1.取樣100微升,用PBS洗滌兩次 2.加入1 mL提前稀釋好的DCFH-DA(提前用PBS稀釋,至濃度10 µmol/L),重懸,細(xì)胞濃度為1*106cfu/mL,(OD600約0.1~0.2之間) 3.37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)25 min,每隔4 min,對(duì)細(xì)胞上下顛倒一次,使得染液與細(xì)胞充分接觸 4.細(xì)胞被熒光染料充分標(biāo)記后,離心,PBS洗1~2次,(將未進(jìn)入細(xì)胞的熒光染料去除)收集沉淀,用PBS重懸,加入流式管中,等待檢測(cè) 5.流式檢測(cè)用FLI通道,488nm激發(fā),發(fā)射波長(zhǎng)525 nm,檢測(cè)各樣品熒光強(qiáng)度。 一直找不到合適的原因,請(qǐng)大神賜教,萬(wàn)分感謝! |

銅蟲 (正式寫手)

新蟲 (小有名氣)
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新蟲 (小有名氣)
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