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[交流]
實(shí)時(shí)定量PCR步驟
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| 哪位大俠有實(shí)時(shí)定量PCR的詳細(xì)操作步驟，我是初學(xué)者。謝謝 |
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3樓2019-02-22 08:42:58
BioThriller
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 25.9
- 帖子: 9
- 在線: 12.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2469274
- 注冊(cè): 2013-05-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物生理與生化
★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
吃瓜的半仙: 金幣+3, 謝謝 2019-02-22 08:41:09
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
吃瓜的半仙: 金幣+3, 謝謝 2019-02-22 08:41:09
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以下是SYBR Green 的Protocol 1x H2O 6.3μl SYBR Reagent 5μl Fwd 10uM 0.1 μl Rev 10uM 0.1 μl 這四個(gè)試劑可以做一個(gè)Mix，分裝 最后加cDNA cDNA 1:5 1.0 μl (注：cDNA 可以稀釋為1：10，或者 1：5 ，可以先試驗(yàn)一下） Total 12.5μl qRT-PCR 程序 （我們用的是Roche LightCycler 480 II） 95°C 2 min, 40 cycles (95°C, 15 s; 60°C, 30 s; 68°C, 20 s). 最后Relative expression 用2-△△CT 法， 如果第一次做新引物，記得單獨(dú)跑一下引物看看溶解曲線，希望對(duì)你有幫助。具體過程中應(yīng)該還有很多需要注意的事情，也會(huì)出現(xiàn)各種問題，網(wǎng)上也有挺多的帖子，最好找個(gè)人帶一下！ |
2樓2019-02-21 23:03:26
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