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實(shí)時(shí)定量PCR步驟
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| 哪位大俠有實(shí)時(shí)定量PCR的詳細(xì)操作步驟,我是初學(xué)者。謝謝 |
新蟲(chóng) (初入文壇)
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以下是SYBR Green 的Protocol 1x H2O 6.3μl SYBR Reagent 5μl Fwd 10uM 0.1 μl Rev 10uM 0.1 μl 這四個(gè)試劑可以做一個(gè)Mix,分裝 最后加cDNA cDNA 1:5 1.0 μl (注:cDNA 可以稀釋為1:10,或者 1:5 ,可以先試驗(yàn)一下) Total 12.5μl qRT-PCR 程序 (我們用的是Roche LightCycler 480 II) 95°C 2 min, 40 cycles (95°C, 15 s; 60°C, 30 s; 68°C, 20 s). 最后Relative expression 用2-△△CT 法, 如果第一次做新引物,記得單獨(dú)跑一下引物看看溶解曲線,希望對(duì)你有幫助。具體過(guò)程中應(yīng)該還有很多需要注意的事情,也會(huì)出現(xiàn)各種問(wèn)題,網(wǎng)上也有挺多的帖子,最好找個(gè)人帶一下! |
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蘇堯幺幺 2026-03-03 | 9/450 |
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likeihood 2026-03-06 | 15/750 |
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[考研] 081700學(xué)碩一志愿北京化工大學(xué)數(shù)二英一過(guò)六級(jí)有競(jìng)賽求調(diào)劑 +5 | galaxary 2026-03-07 | 7/350 |
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