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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 動植物 » 實驗技術 » 實時定量PCR步驟
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[交流]
實時定量PCR步驟
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| 哪位大俠有實時定量PCR的詳細操作步驟，我是初學者。謝謝 |
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BioThriller
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★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
吃瓜的半仙: 金幣+3, 謝謝 2019-02-22 08:41:09
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
吃瓜的半仙: 金幣+3, 謝謝 2019-02-22 08:41:09
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以下是SYBR Green 的Protocol 1x H2O 6.3μl SYBR Reagent 5μl Fwd 10uM 0.1 μl Rev 10uM 0.1 μl 這四個試劑可以做一個Mix，分裝 最后加cDNA cDNA 1:5 1.0 μl (注：cDNA 可以稀釋為1：10，或者 1：5 ，可以先試驗一下） Total 12.5μl qRT-PCR 程序 （我們用的是Roche LightCycler 480 II） 95°C 2 min, 40 cycles (95°C, 15 s; 60°C, 30 s; 68°C, 20 s). 最后Relative expression 用2-△△CT 法， 如果第一次做新引物，記得單獨跑一下引物看看溶解曲線，希望對你有幫助。具體過程中應該還有很多需要注意的事情，也會出現(xiàn)各種問題，網(wǎng)上也有挺多的帖子，最好找個人帶一下！ |
2樓2019-02-21 23:03:26
3樓2019-02-22 08:42:58
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