 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2020 | 回復(fù): 6 | ||
tq0ax1r新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
質(zhì)粒能表達(dá)MBP融合蛋白，不能表達(dá)目標(biāo)蛋白，向大神求解！ 已有4人參與
|
|
最近新構(gòu)建了一個(gè)新的質(zhì)粒，本人在這方面經(jīng)驗(yàn)不足，插入序列就是網(wǎng)上搜到的wide type序列，沒(méi)有做任何改變，是一個(gè)人源蛋白。原質(zhì)粒是PET系列帶MBP融合蛋白，在Rosetta大腸桿菌里表達(dá)，沒(méi)有插入序列的空質(zhì)粒能大量表達(dá)MBP，但是把序列插入在MBP后SDSPAGE上沒(méi)有看到表達(dá)蛋白條帶。請(qǐng)問(wèn)： 1. 想過(guò)換宿主菌，但是既然同樣的質(zhì)粒在這里能表達(dá)MBP，不能表達(dá)MBP+新蛋白，是否不是宿主菌的原因？ 2. 試過(guò)20度，25度，OD = 0.7，0.8，0.9誘導(dǎo)，沒(méi)有區(qū)別 3. 想嘗試換培養(yǎng)基，目前我只知道LB和M9，除此以外大家還能告知一些其它可以嘗試的培養(yǎng)基嗎？ 4. 想過(guò)是否是因?yàn)槲矣玫脑蛐蛄�，沒(méi)有做密碼子優(yōu)化，網(wǎng)上可以做codon optimization，打算嘗試一下，重新合成然后再插入這個(gè)質(zhì)粒，大家覺(jué)得會(huì)有效果嗎？P.S. rosetta本身就有表達(dá)稀有密碼子的優(yōu)勢(shì)，所以我一開(kāi)始沒(méi)有在意這點(diǎn)，到現(xiàn)在也不知道到底是不是密碼子沒(méi)優(yōu)化的原因。 5. 有人提議直接換質(zhì)粒，我對(duì)不同質(zhì)粒了解甚少，大家有什么推薦？ 讀碼框都確認(rèn)過(guò)，測(cè)序也是對(duì)的，這些應(yīng)該不是問(wèn)題，當(dāng)然老板也建議重新?lián)Q家公司再測(cè)一次序列。 請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的大神賜教，感激不盡！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
085701環(huán)境工程 求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
264求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
085600 材料與化工 298
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
0854總分272
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
EST拒稿重投
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計(jì)算機(jī)、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報(bào)考
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
0703化學(xué)學(xué)碩 288分
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
接收調(diào)劑
已經(jīng)有23人回復(fù)
-
化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211
已經(jīng)有3人回復(fù)
weizhe34
至尊木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 22413.1
- 散金: 22
- 紅花: 2
- 帖子: 3919
- 在線: 921.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 432244
- 注冊(cè): 2007-08-12
- 專業(yè): 人類營(yíng)養(yǎng)
2樓2019-02-05 11:14:59
lizimu566
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 21 (小學(xué)生)
- 金幣: 1834.1
- 散金: 14
- 紅花: 4
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 606
- 在線: 114.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4221341
- 注冊(cè): 2015-11-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2019-02-12 16:19:41
4樓2019-02-13 14:11:13
a13515517892
木蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 74 (初中生)
- 金幣: 4597.6
- 散金: 700
- 紅花: 14
- 帖子: 292
- 在線: 65.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1076526
- 注冊(cè): 2010-08-18
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
5樓2019-02-15 14:37:25
厚德求是
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 41 (小學(xué)生)
- 金幣: 2270.6
- 散金: 1050
- 紅花: 3
- 帖子: 1208
- 在線: 107.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2418606
- 注冊(cè): 2013-04-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
|
質(zhì)粒測(cè)序過(guò)嗎？確定克隆成功了？感覺(jué)很有可能是克隆的問(wèn)題，建議檢查引物重做pcr。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
6樓2019-04-10 13:27:29
墨竹韻
金蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1581.4
- 散金: 5252
- 紅花: 24
- 沙發(fā): 6
- 帖子: 3609
- 在線: 941.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4497426
- 注冊(cè): 2016-03-12
- 性別: MM
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
7樓2025-04-12 10:49:37
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 tq0ax1r 的主題更新
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0854總分272 +5 | 打小就是老實(shí)人 2026-03-02 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 理學(xué)，工學(xué)，農(nóng)學(xué)調(diào)劑，少走彎路，這里歡迎您！ +8 | likeihood 2026-03-02 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 人間唯你是清歡 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | Guo_yuxuan 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 267求調(diào)劑 +6 | 釣魚(yú)佬as 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +5 | 13853210211 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +6 | wyyyqx 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 清華大學(xué) 材料與化工 353分求調(diào)劑 +5 | awaystay 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工京區(qū)271求調(diào)劑 +7 | 11ing 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +10 | 人間唯你是清歡 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 085600材料工程一志愿中科大總分312求調(diào)劑 +9 | 吃宵夜1 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料284求調(diào)劑，一志愿鄭州大學(xué)英一數(shù)二專碩 +15 | 想上岸的土撥鼠 2026-02-28 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 291 求調(diào)劑 +3 | 化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265分求調(diào)劑不調(diào)專業(yè)和學(xué)校有行學(xué)上就 +6 | 禮堂丁真258 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 此成果不能導(dǎo)入原因：元數(shù)據(jù)必填信息不完整，可 進(jìn)行補(bǔ)充。 +4 | Kittylucky 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大材料學(xué)碩298分，求調(diào)劑 +6 | wsl111 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工專碩342，一志愿大連理工大學(xué)，求調(diào)劑 +6 | kyf化工 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +3 | L-xin? 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +3 | dua1 2026-03-01 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿]
Optics letters投稿被拒求助
 30+3
|
luckyry 2026-02-26 | 4/200 |
|