 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1312 | 回復(fù): 7 | |||
| 【有獎交流】積極回復(fù)本帖子，參與交流，就有機(jī)會分得作者 飛不動D鳥 的 5 個金幣 ，回帖就立即獲得 1 個金幣，每人有 1 次機(jī)會 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
質(zhì)粒pYES2轉(zhuǎn)化酵母沒有轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)
|
|||
|
各位前輩： 我最近在做酵母的轉(zhuǎn)化實(shí)驗，用到兩個質(zhì)粒一個是cas9質(zhì)粒一個是pYES2質(zhì)粒，用醋酸鋰轉(zhuǎn)化法，具體方法如下： 1. 挑取單克隆酵母BY4741于10 ml YPD培養(yǎng)基中，30℃，250 rpm過夜培養(yǎng)。 2. 測定過夜培養(yǎng)之后的OD600，轉(zhuǎn)接于50 ml YPD培養(yǎng)基中，使初始OD600=0.4，細(xì)胞數(shù)目約為5×106 。繼續(xù)培養(yǎng)2-4 h，使OD600=1.3-1.5，細(xì)胞個數(shù)約為2×107。 3. 用50 ml 離心管，2500 rpm，5 min 離心，收集菌體，在40 ml 1×TE懸浮。 4. 2500 rpm，5 min 離心，去上清，收集菌體重懸于2 ml 1×LiAc/0.5 TE 中。 5. 在室溫下靜置10 min。 6. 然后依次加入1 μg的質(zhì)粒，100 μl的酵母懸液，700 μl 1×LiAc/40%PEG3350/1×TE，劇烈振蕩1 min 。在30℃情況下孵育30 min。 7. 加入88 μl DMSO，混勻，在42℃下熱激7min（或20 min-25 min） 8. 2500 rpm ，5 min 離心，去除上清，在200 μl 1× TE中重懸。 9. 涂布于選擇培養(yǎng)基含有G418的培養(yǎng)基（G418濃度：200 μg/ml） 10. 將平板在30 ℃培養(yǎng)2-3天。 可是連著做了幾次了平板上都沒有轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)，想問下大家問題出在哪里了，或者有什么可以改進(jìn)的地方嗎. |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向
已經(jīng)有19人回復(fù)
-
085600材料與化工，一志愿廣州985，求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料學(xué)學(xué)碩308分/本科東北大學(xué)/一志愿西北工業(yè)大學(xué)/
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
334求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
0856材料與化工求調(diào)劑！
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿武理085601專碩347分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
招調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
材料與化工，291，求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
求調(diào)劑，學(xué)校研究所都可以，材料與化工267分
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
332材料求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
江西師范大學(xué)陶端健教授團(tuán)隊2026年碩士研究生招生公告
+1/231
-
寧夏大學(xué)青年長江學(xué)者團(tuán)隊招收2026級有機(jī)化學(xué)方向?qū)徍酥撇┦可?/a>
+2/98
-
面對核三廢，威格屏蔽手套箱如何筑牢第一道安全防線？
+1/93
-
招聘換能器工程師/聲學(xué)工程師！��！
+1/83
-
重慶大學(xué)李延軍課題組招聘有機(jī)/藥化方向青年教師、博士后和研究助理數(shù)名
+1/78
-
動力工程、動力工程及工程熱物理學(xué)科考研調(diào)劑碩士研究生（學(xué)碩/專碩均可）
+2/36
-
西安工程大學(xué)能源化工新材料研發(fā)項目組接收2026年研究生
+1/35
-
中國計量科學(xué)研究院長度量子基準(zhǔn)實(shí)驗室2026年調(diào)劑招生
+1/32
-
2026年北京石油化工學(xué)院環(huán)境學(xué)科-水污染控制工程方向課題組歡迎您
+1/21
-
招博士，申請考核制，環(huán)境化學(xué)、環(huán)境毒理/健康方向
+1/18
-
天津大學(xué)浙江研究院（寧波）誠聘高分子/化學(xué)/材料方向博士后、青年特聘研究員
+1/11
-
徐工-環(huán)境工程學(xué)院-招收調(diào)劑碩士
+1/9
-
青島大學(xué)功能紡織品與先進(jìn)材料研究院招收2026級申請考核制博士
+1/7
-
Analytical Science Advances（Wiley出版社）長期征稿中..
+1/7
-
教育部長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊發(fā)展計劃”入選團(tuán)隊招收 材料，化學(xué)與化工博士研究生
+1/7
-
-分子探針等化學(xué)/生物方向博士后和研究助理
+1/6
-
轉(zhuǎn)讓一批鈉離子電池正極材料，聚陰離子正極。
+1/3
-
中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院趙博課題組碩士招生
+1/2
-
陜西科技大學(xué)招生學(xué)術(shù)博士生1名(鋰鈉離子電池/光電催化/環(huán)境功能材料/熱電材料)
+1/1
-
材料類調(diào)劑
+1/1
3樓2020-09-12 00:08:04
7樓2020-09-17 10:24:00
8樓2021-12-23 06:51:58
簡單回復(fù)
斕曦20194樓
2020-09-12 06:25
回復(fù)
飛不動D鳥(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向 +11 | lisimayy 2026-03-04 | 19/950 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085600材料與化工，一志愿廣州985，求調(diào)劑 +3 | qqyyaill 2026-03-05 | 3/150 |
|
|
[考研] 332材料求調(diào)劑 +3 | zjy101327 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +17 | February_Feb 2026-03-01 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 281電子信息求調(diào)劑 +5 | jhtfeybgj 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校 +6 | 云朵452 2026-03-02 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 320材料與化工，求調(diào)劑 +6 | 鶴遨予卿 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +5 | 2103240126 2026-03-02 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 325求調(diào)劑 +5 | 學(xué)家科 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 347分電子信息專碩求調(diào)劑 +3 | 咕嘟咕嘟1 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | G212 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大能動297求調(diào)劑，本科川大 +3 | 邵11 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +6 | 天下熯 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 338求調(diào)劑 +5 | 18162027187 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑一志愿東北林業(yè)大學(xué)材料與化工英二數(shù)二 +5 | 蟲蟲蟲蟲蟲7 2026-03-01 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南理工大學(xué)材料與化工326分，求調(diào)劑 +3 | wujinrui1 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +10 | 天下熯 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料類求調(diào)劑 +11 | wana_kiko 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[基金申請]
剛錄用，沒有期刊號，但是在線可看的論文可以放為代表作嗎
10+3
|
arang1 2026-03-01 | 3/150 |
|