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qwedfxcv新蟲 (初入文壇)
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畢赤酵母KM71真核表達(dá)問題 已有6人參與
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| 我用畢赤酵母KM71進(jìn)行表達(dá)抗菌肽，分子量為3kd-8kd之間，構(gòu)建載體沒有問題，載體為pPIC9K，進(jìn)行篩選也可以篩選到，用載體上的引物與我片段的引物進(jìn)行驗證也沒有問題，將其電轉(zhuǎn)進(jìn)KM71中，進(jìn)行誘導(dǎo)96h，加甲醇的量為0.5%，誘導(dǎo)條件為250 rpm/30°，酵母生長為2升BMGY,轉(zhuǎn)1/5到BMMY中，誘導(dǎo)96h結(jié)束后取上清發(fā)酵液進(jìn)行冷凍濃縮，之后進(jìn)行考染、Western檢測，結(jié)果檢測不到蛋白，我想請問各位大佬，是否有那個重要的條件我沒有注意到，感覺蛋白根本誘導(dǎo)不出來。 |
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