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寡核苷酸合成儀“抽風(fēng)”，結(jié)果出來一串亂碼
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上周做一條25bp的引物，設(shè)定好了序列，寡核苷酸合成儀哐當(dāng)哐當(dāng)跑了一下午。收樣送去質(zhì)譜，結(jié)果出來我傻了——分子量對不上，差了整整300多。 一開始懷疑是單體加錯了，翻記錄，沒毛病。又懷疑是試劑過期，查批號，還有半年效期。折騰兩天找不到原因，氣得把合成日志翻出來一條條對。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)一個詭異的地方：程序記錄顯示第12個循環(huán)的“脫保護(hù)”步驟多停了5分鐘。就這5分鐘，導(dǎo)致那個位置的堿基脫落了一部分，后面的延伸全亂套了。 打電話問工程師，人家說可能是氮?dú)鈮毫Σ▌訉?dǎo)致閥門延遲。這玩意兒平時根本注意不到，誰能想到氣源還能影響合成序列。 后來學(xué)乖了，每次啟動寡核苷酸合成儀前先看氣源壓力，跑的過程中隔幾個小時瞄一眼實(shí)時日志。還有寡核苷酸合成用的乙腈，以前覺得差不多就行，現(xiàn)在老老實(shí)實(shí)加分子篩脫水，稍微有點(diǎn)水分就換新的。 搞寡核苷酸合成這活兒，儀器再智能，該盯的細(xì)節(jié)一個都不能少。有時候出問題不是大事，就是那些沒人提醒過的小地方在作妖。 有人遇到過類似的“莫名其妙”的合成失敗嗎？最后怎么找到原因的？ |
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