 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 465 | 回復: 1 | |||
畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
|
[交流]
污染了，如何鑒定是什么壞東西干的？ 已有1人參與
|
|
養(yǎng)細胞遭遇污染是一種非常常見的情況，如果一覺睡醒發(fā)現(xiàn)細胞周圍有許多黑色點點或桿狀不明物體在旋轉(zhuǎn)跳躍，那也差不多可以輕輕地閉上眼把整個瓶子都扔了。 1 總體思路 先說路線：分離 → 純化 → 鑒定 如果我們能確定污染物是一種細菌，即便肉眼可見有很多黑點，細菌的生物量很可能還是不比原本培養(yǎng)的細胞多。 那么，如何有效地將數(shù)量上可能占劣勢的細菌與大量動物細胞分離開，并進行純化與鑒定，就是核心難點。 在細胞培養(yǎng)污染這個場景中，制備送檢樣本比鑒定本身還要重要。 有一些比較老的教科書認為應該直接從培養(yǎng)物中取樣，用無菌生理鹽水進行稀釋，通過平板劃線或涂布稀釋培養(yǎng)獲取單個菌落，然后取單個菌落進行染色、生化、PCR等檢測。 但是，從培養(yǎng)物中分離細菌這一步的要點應該是如何把培養(yǎng)的細胞和細菌分開，直接稀釋做不到這一點，所以我們在中間增加了一些步驟。 另外，現(xiàn)在各種商品化試劑盒非常豐富，檢驗科的同學應該見過，類似下面這種試紙就可以快速鑒定是否屬于某些常見菌，PCR試劑盒種類也很多，所以鑒定這一塊也比較省事了。 a 分離與富集：將細菌從培養(yǎng)物中分離出來 這是最關(guān)鍵的一步，目標是最大程度地減少真核細胞的干擾，富集細菌。把有限的試劑用到細菌上。 細菌雖然也是細胞，但哺乳動物細胞（直徑~10-20 μm）比大多數(shù)細菌（直徑~0.5-5 μm）大得多，所以我們看到的往往是會動的黑點。 利用這一點，我們可以用一些比較便宜的方法進行初步分離與富集，避免在鑒定這一步花更多經(jīng)費。 這里有兩個物理方法：差速離心法和過濾法。 差速離心法 操作： 取少量被污染的培養(yǎng)物（1-2 mL）。 首先低速離心：首先低速離心以分離細胞與細菌。如以200 × g離心力離心5-10 min使培養(yǎng)的細胞形成松散的沉淀，而細菌大多依然懸浮在上清中。小心吸取含細菌的上清液，轉(zhuǎn)移至新的無菌離心管中。 其次高速離心：此時將上清以約10,000-15,000 × g的離心力離心 2-5 min，沉淀細菌。隨后棄上清。 用少量無菌生理鹽水或PBS重懸細菌沉淀。你得到的就是一個細菌已經(jīng)被顯著富集、而且細胞碎片干擾大大降低的樣品。 優(yōu)勢：多快好省，能有效去除大部分真核細胞。 過濾法 根據(jù)細菌和細胞的大小差異，選擇孔徑為0.45 μm的濾膜過濾。 細菌（尤其是桿狀這種一條的）可以通過濾膜，而哺乳動物細胞則被截留。只需將污染培養(yǎng)物通過無菌過濾器，收集濾液即可。濾液中含有細菌，可用于后續(xù)涂布。 但需注意有些細菌長得比較大，又或是成簇的細菌、粘附在細胞上的細菌，這些塊頭比較大的個體可能被截留，造成漏檢。 如果原細胞培養(yǎng)液中含抗生素，細菌生長可能被抑制。此時最好還是離心一次，以去除含抗生素的上清，用無菌PBS洗滌沉淀。 b 純化：獲取單菌落 選擇性培養(yǎng) 在涂布平板前，根據(jù)獲得的細菌樣本量，可能還是要先簡單富集培養(yǎng)一下，以獲取更多的可用菌，或進一步分離。 可以考慮將樣品接種到細菌專用液體培養(yǎng)基（如實驗室里那瓶引人注目的“LB肉湯”）中，在適宜溫度（可以直接設置37°C）下震蕩培養(yǎng)幾小時。 原本培養(yǎng)的細胞一般不會很喜歡這種沒有血清又不是貼身設計的培養(yǎng)基，可以達到一定富集、純化活菌的效果。 獲取單菌落 然后進入不必多言的教科書傳統(tǒng)方法環(huán)節(jié)： 平板劃線法 涂布平板法 然后將平板倒置于普通培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-3天。有長勢喜人的菌落后，挑取形態(tài)單一、特征明顯的單個菌落進行革蘭氏染色鏡檢，確認是否為純培養(yǎng)物。 c 鑒定：鑒定細菌物種 作為第一步的革蘭氏染色 除了記錄細菌形態(tài)（球菌/桿菌/螺旋菌等基礎分類）外，可以考慮首先進行革蘭氏染色，以將后續(xù)鑒定限制在一個范圍內(nèi)，節(jié)省精力資源。 畢合生物(www.bihebio.com)提供服務內(nèi)容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學、天然產(chǎn)物 |
回復此樓» 猜你喜歡
泣血叩求調(diào)劑恩，愿以丹心報師恩
已經(jīng)有3人回復
-
274求調(diào)劑0856材料化工
已經(jīng)有6人回復
-
0856化工原理
已經(jīng)有3人回復
-
291分獸醫(yī)專碩 一志愿華中農(nóng)
已經(jīng)有3人回復
-
工科0856專碩化學工程269能調(diào)劑嗎
已經(jīng)有8人回復
-
341求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
接受26屆調(diào)劑生
已經(jīng)有23人回復
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
308求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
271求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
滴滴Grace合肽庫
金蟲 (正式寫手)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1702.3
- 散金: 226
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 827
- 在線: 74小時
- 蟲號: 23321770
- 注冊: 2020-08-05
- 性別: MM
- 專業(yè): 外國語言
2樓2025-12-22 09:33:51
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 畢合生物2024 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 接受26屆調(diào)劑生 +22 | 豬豬豬毛 2026-03-06 | 23/1150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿江南大學085701環(huán)境工程專碩總分287求調(diào)劑 +4 | 18266118446 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 讀博申請 +4 | 感dd 2026-03-10 | 6/300 |
|
|
[考研] 327分求調(diào)劑086 +4 | 西紅柿?小帥 2026-03-09 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 找博導 +4 | 小呆呆熊 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 2026級碩士研究生招生/調(diào)劑 +3 | 知足常樂的樂 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 310 070300化學求調(diào)劑 +4 | 撲風鈴的貓 2026-03-08 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703求調(diào)劑 +10 | c297914 2026-03-06 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | Yyt楊1 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26年博士申請 +4 | 科研狗111 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +3 | 朔朔話 2026-03-08 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +8 | Trying] 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 070300化學求調(diào)劑292分 +3 | 打烊eee 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑推薦 +4 | 微辣不吃 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 材料工程調(diào)劑
+6
|
zbcm_zbcm 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085602高分子方向求調(diào)劑 +7 | tlgudy 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +4 | 大爆炸難民 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求調(diào)劑 +7 | 邱gl 2026-03-05 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料085601一志愿哈工大317 +4 | 壓迫感行 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 274環(huán)境工程求調(diào)劑 +6 | 扶柳盈江 2026-03-05 | 6/300 |
|