 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 420 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
大家做親和層析柱的時候，有沒有遇到過載量突然下降或者非特異吸附特別兇的情況？
|
|
蟲友們好，最近在實驗室純化蛋白，又被親和層析柱給折騰得不輕，心里一堆問號，實在憋不住想上來跟大家嘮嘮，看看有沒有同病相憐或者有高見的朋友。 我用的就是最常見的那種鎳柱，純化帶His標簽的蛋白，方法也是老套路了。但最近這根柱子明顯感覺“體力不支”，上樣量沒變，但流穿里的目標蛋白越來越多，感覺載量唰唰往下掉，心都在滴血啊。這還不是最頭疼的，更煩的是雜蛋白粘得那叫一個結(jié)實，洗脫的時候跟著目標蛋白一起下來，純度簡直沒眼看。我就在那兒琢磨，這親和層析柱的脾氣到底該怎么摸透？ 我自個兒瞎分析了一下，感覺可能性太多了，腦子有點亂。比如柱子壽命，是不是反復(fù)再生太多次，填料里的配基（像鎳離子）脫落了？或者上樣樣品沒處理好，雖然離心過濾了，但會不會有些細胞碎片或者油脂樣的東西偷偷把填料孔給堵了、包住了？還有樣品緩沖液的條件，pH、離子強度甚至還原劑啥的，是不是悄悄改變了蛋白和配基的“親和力”？有時候甚至懷疑，蛋白自己會不會形成二聚體或者多聚體，把標簽給藏起來了，導致柱子抓不住？ 另外，非特異吸附這個老大難，大家一般怎么破？我試過在緩沖液里加點低濃度的咪唑或者NaCl，有時候管用，有時候又感覺效果不明顯。是不是不同蛋白的性子差別太大，都得一點點摸條件？還有，柱子保存和維護，大家有沒有什么特別順手的小技巧？比如怕長菌，但殺菌劑會不會傷柱子？ 總之，感覺親和層析柱這東西吧，用起來原理好像挺直接，但真想讓它穩(wěn)定高效地工作，里頭細節(jié)太多了，稍不注意就給你點顏色看看。特別想知道大家在實際操作中，有沒有總結(jié)出什么實用的經(jīng)驗或者踩過哪些坑？比如有沒有什么跡象能提前判斷柱子狀態(tài)不行了？或者遇到我這種問題，你們的排查順序一般是啥樣的？ 純粹是技術(shù)討論，求大佬們分享點心得，救救孩子吧，一起交流學習才能少走彎路��！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
264求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
085600 材料與化工 298
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
0854總分272
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
EST拒稿重投
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計算機、人工智能等專業(yè)的同學報考
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
0703化學學碩 288分
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
接收調(diào)劑
已經(jīng)有23人回復(fù)
-
化學 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
304分材料專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 2025dream 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化學 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211 +3 | 土土小蟲 2026-03-03 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[基金申請]
 成果系統(tǒng)訪問量大，請15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請諒解。
+9
|
xhuama 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 中國林科院林化所（南京）2026年招收化學/材料/環(huán)境工程等背景碩士研究生3名 +3 | realstar2006 2026-02-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化工專碩調(diào)劑 +4 | 利好利好. 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +9 | ErMiao1020 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
計算機學碩 分數(shù)285求調(diào)劑
+4
|
glwshine 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程求調(diào)劑 +3 | 1431251 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料類考研調(diào)劑 +6 | gemmgemm 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
材料325求調(diào)劑
 30+3
|
mariusuki 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +4 | Ricardo1113 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +10 | 人間唯你是清歡 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 材料復(fù)試調(diào)劑 +5 | 學材料的點 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學，材料，環(huán)境類求調(diào)劑 +7 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | 今夏不夏 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化工專碩342，一志愿大連理工大學，求調(diào)劑 +6 | kyf化工 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +3 | 熊境喆 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[碩博家園] 博士自薦 +7 | 科研狗111 2026-02-26 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +4 | 麻辣魷魚 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 簡木ChuFront 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 52hz~~ 2026-02-28 | 5/250 |
|