 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 739 | 回復: 0 | |||
科研戰(zhàn)神來了新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
實驗技術(shù)干貨 | Transwell 操作標準化流程及避坑指南
|
|
一、實驗原理Transwell 實驗的核心在于通過多孔膜裝置模擬體內(nèi)細胞穿越組織屏障的生理過程，常用于研究細胞遷移、趨化性和侵襲能力。其原理關(guān)鍵要點如下： •裝置構(gòu)成：由 Transwell 小室（含滲透膜）和孔板組成，膜上小孔直徑通常為 0.1 - 12μm（根據(jù)細胞類型選擇，如腫瘤細胞侵襲實驗常用 8μm 孔徑）。 •細胞運動邏輯：上室接種細胞，下室放置化學引誘劑（如 FBS、生長因子）形成濃度梯度，細胞感知刺激后通過偽足伸展、細胞骨架重構(gòu)等方式穿過膜孔遷移至下室。 •生理意義：遷移實驗可研究細胞在無基質(zhì)膠情況下的遷移能力（如炎癥細胞向趨化因子的移動）；侵襲實驗則在膜上預(yù)鋪基質(zhì)膠（模擬細胞外基質(zhì)），評估細胞突破屏障的能力（如腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移）。 二、實驗 Tips 實驗準備環(huán)節(jié)：桌面用 75% 酒精擦拭，器材提前滅菌（如小室、槍頭），避免污染影響細胞活性； 固定染色環(huán)節(jié)：多聚甲醛固定前先洗去培養(yǎng)基殘留，結(jié)晶紫染色后可不洗直接擦細胞，減少雜質(zhì)干擾； 棉簽操作環(huán)節(jié)：擦拭上室細胞時力度輕柔，沿一個方向擦拭（避免來回摩擦導致膜孔堵塞），防止破壞膜結(jié)構(gòu)； 拍照記錄環(huán)節(jié)：務(wù)必拍到膜孔結(jié)構(gòu)，標注放大倍數(shù)和視野位置，增強結(jié)果真實性。 三、常見問題解決 遷移細胞過少：可能因細胞濃度過低、趨化因子濃度不足或培養(yǎng)時間過短，需優(yōu)化濃度梯度和時間； 背景染色深：多聚甲醛固定后清洗不徹底，或結(jié)晶紫染色時間過長，需縮短染色時間并充分洗去多余染料。 四、 Transwell 小室操作 1. 細胞懸液制備 消化細胞后，無血清培養(yǎng)基洗 3 次（去除血清中的生長因子干擾），計數(shù)后配置成 2×10⁵/ml 懸液（首次實驗需摸索最佳細胞濃度，如 2 - 5×10⁴細胞 / 小室）。 2. 上室與下室接種 上室加入 100μl 細胞懸液（含 2×10⁴細胞），下室加入 600μl 含 20% FBS 的完全培養(yǎng)基（FBS 作為趨化因子誘導遷移）。 ⚠ 關(guān)鍵細節(jié)：上室加樣時避免氣泡，下室液體需覆蓋膜底部，確保濃度梯度有效形成。 五、培養(yǎng)與染色 1. 孵育與固定染色 37℃、5% CO₂ 孵育 48 小時（首次實驗需測試 24 - 72 小時不同時間點，觀察遷移效率）。取出小室，PBS 洗 2 次，4% 多聚甲醛固定 30 分鐘，結(jié)晶紫（無需稀釋）染色 30 分鐘，再用 PBS 洗 2 次。 ✅操作技巧：用棉簽輕擦上室未遷移細胞時，小室內(nèi)保留少量 PBS，避免膜干燥或破損。 2. 拍照與觀察 將小室置于載玻片上，倒置顯微鏡下用 10× 或 20× 物鏡拍照，按從左到右順序采集多個視野（如每孔拍 5 個視野），確保覆蓋膜的不同區(qū)域。 六、小室清洗 清洗流程 ddH₂O 浸泡 24 小時，75% 酒精浸泡消毒，紫外線照射 30 分鐘，晾干后密封保存（適用于可重復使用的小室）。 |
回復此樓» 猜你喜歡
085701環(huán)境工程 求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
264求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
085600 材料與化工 298
已經(jīng)有8人回復
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
0854總分272
已經(jīng)有6人回復
-
EST拒稿重投
已經(jīng)有3人回復
-
歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計算機、人工智能等專業(yè)的同學報考
已經(jīng)有11人回復
-
0703化學學碩 288分
已經(jīng)有4人回復
-
接收調(diào)劑
已經(jīng)有23人回復
-
化學 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211
已經(jīng)有3人回復
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 科研戰(zhàn)神來了 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 接收調(diào)劑 +15 | 津萌津萌 2026-03-02 | 23/1150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 304分材料專碩求調(diào)劑 +3 | qiuzhigril 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703 總分319求調(diào)劑 +4 | Xinyuu 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
085600 英一數(shù)二272求調(diào)劑
 5+6
|
vida_a 2026-03-01 | 44/2200 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 人間唯你是清歡 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料328求調(diào)劑 +4 | 一個蘿卜02 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +9 | 鹿沫笙 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0805總分292，求調(diào)劑 +12 | 幻想之殤 2026-03-01 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 267求調(diào)劑 +6 | 釣魚佬as 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 26考研報考西工大材料308分求調(diào)劑 +4 | weizhong123 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +5 | 13853210211 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 338求調(diào)劑 +5 | 18162027187 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工京區(qū)271求調(diào)劑 +7 | 11ing 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 302材料工程求調(diào)劑 +5 | Doleres 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +7 | 明遠求學 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料085601調(diào)劑 +5 | 多多子. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | 今夏不夏 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265分求調(diào)劑不調(diào)專業(yè)和學校有行學上就 +6 | 禮堂丁真258 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +10 | 天下熯 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +3 | cgyzqwn 2026-03-01 | 7/350 |
|