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ELISA實驗為什么要嚴格按照說明書操作 已有1人參與
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市面上銷售的ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）試劑盒，種類繁多，不同指標的檢測范圍及實驗方法不盡相同，甚至相同指標不同廠家的試劑盒實驗方法都可能會不一樣。但基本原理都是一致的，是將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上，進行免疫反應(yīng)的定性和定量方法。 [斜眼R]每一個試劑盒里都會有對應(yīng)的說明書，注意事項里大多都會提到“實驗嚴格按照說明書的操作進行”。為什么要嚴格按照說明書操作？為了更完整的回答這個問題，需要先回顧一下ELISA各種方法的原理。 根據(jù)試劑的來源和標本的性狀及檢測的具體條件，可設(shè)計出不同類型的檢測方法。大致分為以下幾類： Part 1：雙抗體夾心法測抗原（見P2） Part 2：雙抗原夾心法測抗體（見P2） Part 3：競爭法測抗原（見P3） Part 4：間接法測抗體（見P3） 如果不按說明書操作可能會出現(xiàn)的不滿意結(jié)果： [一R]先說最嚴重的操作錯誤，看錯或壓根不看試劑盒配套說明書，不按操作步驟加樣。比如把競爭法的試劑盒當作雙抗體夾心法來做，導(dǎo)致的結(jié)果就是整板顯示很強的藍色，無任何梯度； [二R]混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒，所含的試劑成分很可能是不一樣的，混用導(dǎo)致的結(jié)果是，浪費珍貴的樣本，樣品的回收率達不到預(yù)期值，如果混用不同試劑盒的酶復(fù)合物，會導(dǎo)致顯色過弱或過強，因為每種試劑盒所用酶復(fù)合物效價可能不一樣； [三R]不看文獻或者不做預(yù)實驗。比如某個試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻報道推算樣本應(yīng)該1:10稀釋，結(jié)果稀釋成1:1000，導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過弱，結(jié)果不可用； [四R]不校準移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度。導(dǎo)致工作試劑濃度不準確，孵育溫度不合適，實驗帶來誤差； [五R]洗滌不充分，每孔洗液加樣過少，或者殘留。導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過快，同時背景較高； [六R]手工洗板時所用槍頭沒有懸空加入洗液，導(dǎo)致洗液污染，整個實驗失��； [七R]剩余酶標板條未及時放入干燥袋，導(dǎo)致酶標板受潮，下一次再做時，顯色過弱或污染，CV值過高； [八R]試劑盒保存條件不當。試劑盒要求放4℃的，放在了-20℃�；蛘咭蠓�-20℃的，放在了4℃。均會導(dǎo)致試劑盒敏感性下降。 以上只是最常見的操作錯誤。順利完成一次ELISA實驗需要注意的細節(jié)很多，許多操作環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量。收到試劑盒還是要認認真真仔細研究說明書才行哦！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2025-09-22 19:48:03
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