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小魚aaas新蟲 (初入文壇)
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ELISA實(shí)驗(yàn)為什么要嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作 已有1人參與
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市面上銷售的ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）試劑盒，種類繁多，不同指標(biāo)的檢測(cè)范圍及實(shí)驗(yàn)方法不盡相同，甚至相同指標(biāo)不同廠家的試劑盒實(shí)驗(yàn)方法都可能會(huì)不一樣。但基本原理都是一致的，是將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上，進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量方法。 [斜眼R]每一個(gè)試劑盒里都會(huì)有對(duì)應(yīng)的說(shuō)明書，注意事項(xiàng)里大多都會(huì)提到“實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行”。為什么要嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作？為了更完整的回答這個(gè)問(wèn)題，需要先回顧一下ELISA各種方法的原理。 根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具體條件，可設(shè)計(jì)出不同類型的檢測(cè)方法。大致分為以下幾類： Part 1：雙抗體夾心法測(cè)抗原（見(jiàn)P2） Part 2：雙抗原夾心法測(cè)抗體（見(jiàn)P2） Part 3：競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原（見(jiàn)P3） Part 4：間接法測(cè)抗體（見(jiàn)P3） 如果不按說(shuō)明書操作可能會(huì)出現(xiàn)的不滿意結(jié)果： [一R]先說(shuō)最嚴(yán)重的操作錯(cuò)誤，看錯(cuò)或壓根不看試劑盒配套說(shuō)明書，不按操作步驟加樣。比如把競(jìng)爭(zhēng)法的試劑盒當(dāng)作雙抗體夾心法來(lái)做，導(dǎo)致的結(jié)果就是整板顯示很強(qiáng)的藍(lán)色，無(wú)任何梯度； [二R]混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒，所含的試劑成分很可能是不一樣的，混用導(dǎo)致的結(jié)果是，浪費(fèi)珍貴的樣本，樣品的回收率達(dá)不到預(yù)期值，如果混用不同試劑盒的酶復(fù)合物，會(huì)導(dǎo)致顯色過(guò)弱或過(guò)強(qiáng)，因?yàn)槊糠N試劑盒所用酶復(fù)合物效價(jià)可能不一樣； [三R]不看文獻(xiàn)或者不做預(yù)實(shí)驗(yàn)。比如某個(gè)試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻(xiàn)報(bào)道推算樣本應(yīng)該1:10稀釋，結(jié)果稀釋成1:1000，導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過(guò)弱，結(jié)果不可用； [四R]不校準(zhǔn)移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度。導(dǎo)致工作試劑濃度不準(zhǔn)確，孵育溫度不合適，實(shí)驗(yàn)帶來(lái)誤差； [五R]洗滌不充分，每孔洗液加樣過(guò)少，或者殘留。導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過(guò)快，同時(shí)背景較高； [六R]手工洗板時(shí)所用槍頭沒(méi)有懸空加入洗液，導(dǎo)致洗液污染，整個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗； [七R]剩余酶標(biāo)板條未及時(shí)放入干燥袋，導(dǎo)致酶標(biāo)板受潮，下一次再做時(shí)，顯色過(guò)弱或污染，CV值過(guò)高； [八R]試劑盒保存條件不當(dāng)。試劑盒要求放4℃的，放在了-20℃�；蛘咭蠓�-20℃的，放在了4℃。均會(huì)導(dǎo)致試劑盒敏感性下降。 以上只是最常見(jiàn)的操作錯(cuò)誤。順利完成一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要注意的細(xì)節(jié)很多，許多操作環(huán)節(jié)都影響到檢測(cè)的質(zhì)量。收到試劑盒還是要認(rèn)認(rèn)真真仔細(xì)研究說(shuō)明書才行哦！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2025-09-22 19:48:03
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