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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
蛋白純化大作戰(zhàn)，His-tag vs Strep-tag，選哪個？
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做蛋白純化實驗，選擇合適的純化系統(tǒng)超重要！His-tag系統(tǒng)和Strep-tag系統(tǒng)的那些事兒，讓你的實驗事半功倍。 1️⃣ His-tag系統(tǒng)：簡單又實惠的“大眾選擇” His-tag系統(tǒng)靠的是蛋白質(zhì)上的組氨酸標(biāo)簽和金屬離子（比如鎳或鈷）的親和作用來純化蛋白質(zhì)。組氨酸標(biāo)簽一般是6個連續(xù)的組氨酸殘基，能和金屬離子形成穩(wěn)定的螯合物。純化時，含His-tag的蛋白質(zhì)能通過金屬離子螯合樹脂（像Ni-NTA或Co-NTA）捕獲，然后改變緩沖液條件（比如增加咪唑濃度）來洗脫目標(biāo)蛋白。 這個系統(tǒng)操作簡單，成本低，能用在多種表達(dá)系統(tǒng)里，包括大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞。而且，它還能在變性條件下純化，這對一些難溶性蛋白來說是個大優(yōu)勢。不過，它也有缺點。它對某些緩沖液成分（比如螯合劑和還原劑）比較敏感，這可能會降低純化效率。而且，它的純化特異性相對低，可能會有一些非特異性結(jié)合的雜質(zhì)蛋白不好去除。 2️⃣ Strep-tag系統(tǒng)：高純度的“貴族選擇” Strep-tag系統(tǒng)則是基于生物素和鏈霉親和素（Streptavidin）之間的超強特異性結(jié)合來純化蛋白質(zhì)的。Strep-tag是個小肽序列，和鏈霉親和素的結(jié)合親和力極高，這種結(jié)合是目前已知的最強的非共價相互作用之一。純化時，含Strep-tag的蛋白質(zhì)可以通過鏈霉親和素修飾的樹脂捕獲，然后通過特定的緩沖液條件來洗脫目標(biāo)蛋白。 這個系統(tǒng)的優(yōu)點是純化特異性和效率極高，在需要高純度蛋白質(zhì)的應(yīng)用里表現(xiàn)很好。而且，它對緩沖液和洗滌條件的耐受性更強，在純化過程中能更有效地去除雜質(zhì)。它也能在多種表達(dá)系統(tǒng)里有效工作，包括大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞。不過，它的成本相對高，而且在某些情況下，標(biāo)簽序列可能會對蛋白質(zhì)的功能產(chǎn)生一定的影響。 3️⃣ 實際應(yīng)用：選哪個系統(tǒng)？ 在實際應(yīng)用中，選His-tag系統(tǒng)還是Strep-tag系統(tǒng)得看具體的實驗需求。要是實驗對蛋白質(zhì)純度要求不高，成本又很重要，那His-tag系統(tǒng)可能是更好的選擇。要是目標(biāo)蛋白在變性條件下能保持活性，His-tag系統(tǒng)也能有效地進行純化。 要是實驗需要高純度的蛋白質(zhì)，尤其是需要去除所有雜質(zhì)蛋白，那Strep-tag系統(tǒng)更有優(yōu)勢。而且，Strep-tag系統(tǒng)在處理一些對緩沖液條件要求嚴(yán)格的蛋白質(zhì)時也表現(xiàn)不錯。 4️⃣ 實驗小貼士 His-tag系統(tǒng)：適合大腸桿菌等簡單表達(dá)系統(tǒng)，操作簡單，成本低。但要注意緩沖液成分，避免螯合劑和還原劑。 Strep-tag系統(tǒng)：適合需要高純度蛋白質(zhì)的實驗，尤其是哺乳動物細(xì)胞等復(fù)雜表達(dá)系統(tǒng)。成本高，但純化效果好。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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