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畢合生物2024銅蟲(chóng) (小有名氣)
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蛋白純化大作戰(zhàn)，His-tag vs Strep-tag，選哪個(gè)？
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做蛋白純化實(shí)驗(yàn)，選擇合適的純化系統(tǒng)超重要！His-tag系統(tǒng)和Strep-tag系統(tǒng)的那些事兒，讓你的實(shí)驗(yàn)事半功倍。 1️⃣ His-tag系統(tǒng)：簡(jiǎn)單又實(shí)惠的“大眾選擇” His-tag系統(tǒng)靠的是蛋白質(zhì)上的組氨酸標(biāo)簽和金屬離子（比如鎳或鈷）的親和作用來(lái)純化蛋白質(zhì)。組氨酸標(biāo)簽一般是6個(gè)連續(xù)的組氨酸殘基，能和金屬離子形成穩(wěn)定的螯合物。純化時(shí)，含His-tag的蛋白質(zhì)能通過(guò)金屬離子螯合樹(shù)脂（像Ni-NTA或Co-NTA）捕獲，然后改變緩沖液條件（比如增加咪唑濃度）來(lái)洗脫目標(biāo)蛋白。 這個(gè)系統(tǒng)操作簡(jiǎn)單，成本低，能用在多種表達(dá)系統(tǒng)里，包括大腸桿菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。而且，它還能在變性條件下純化，這對(duì)一些難溶性蛋白來(lái)說(shuō)是個(gè)大優(yōu)勢(shì)。不過(guò)，它也有缺點(diǎn)。它對(duì)某些緩沖液成分（比如螯合劑和還原劑）比較敏感，這可能會(huì)降低純化效率。而且，它的純化特異性相對(duì)低，可能會(huì)有一些非特異性結(jié)合的雜質(zhì)蛋白不好去除。 2️⃣ Strep-tag系統(tǒng)：高純度的“貴族選擇” Strep-tag系統(tǒng)則是基于生物素和鏈霉親和素（Streptavidin）之間的超強(qiáng)特異性結(jié)合來(lái)純化蛋白質(zhì)的。Strep-tag是個(gè)小肽序列，和鏈霉親和素的結(jié)合親和力極高，這種結(jié)合是目前已知的最強(qiáng)的非共價(jià)相互作用之一。純化時(shí)，含Strep-tag的蛋白質(zhì)可以通過(guò)鏈霉親和素修飾的樹(shù)脂捕獲，然后通過(guò)特定的緩沖液條件來(lái)洗脫目標(biāo)蛋白。 這個(gè)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)是純化特異性和效率極高，在需要高純度蛋白質(zhì)的應(yīng)用里表現(xiàn)很好。而且，它對(duì)緩沖液和洗滌條件的耐受性更強(qiáng)，在純化過(guò)程中能更有效地去除雜質(zhì)。它也能在多種表達(dá)系統(tǒng)里有效工作，包括大腸桿菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。不過(guò)，它的成本相對(duì)高，而且在某些情況下，標(biāo)簽序列可能會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)的功能產(chǎn)生一定的影響。 3️⃣ 實(shí)際應(yīng)用：選哪個(gè)系統(tǒng)？ 在實(shí)際應(yīng)用中，選His-tag系統(tǒng)還是Strep-tag系統(tǒng)得看具體的實(shí)驗(yàn)需求。要是實(shí)驗(yàn)對(duì)蛋白質(zhì)純度要求不高，成本又很重要，那His-tag系統(tǒng)可能是更好的選擇。要是目標(biāo)蛋白在變性條件下能保持活性，His-tag系統(tǒng)也能有效地進(jìn)行純化。 要是實(shí)驗(yàn)需要高純度的蛋白質(zhì)，尤其是需要去除所有雜質(zhì)蛋白，那Strep-tag系統(tǒng)更有優(yōu)勢(shì)。而且，Strep-tag系統(tǒng)在處理一些對(duì)緩沖液條件要求嚴(yán)格的蛋白質(zhì)時(shí)也表現(xiàn)不錯(cuò)。 4️⃣ 實(shí)驗(yàn)小貼士 His-tag系統(tǒng)：適合大腸桿菌等簡(jiǎn)單表達(dá)系統(tǒng)，操作簡(jiǎn)單，成本低。但要注意緩沖液成分，避免螯合劑和還原劑。 Strep-tag系統(tǒng)：適合需要高純度蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)，尤其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞等復(fù)雜表達(dá)系統(tǒng)。成本高，但純化效果好。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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