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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞培養(yǎng)“翻車”？這些常見(jiàn)錯(cuò)誤別再犯啦！
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細(xì)胞培養(yǎng)可是實(shí)驗(yàn)室里的“精細(xì)活”，稍不注意就容易“翻車”。那些常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)操作錯(cuò)誤，讓你的細(xì)胞健康又茁壯！ 1️⃣ PART.01 復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮 01 細(xì)胞本身貼壁能力較弱 以細(xì)胞轉(zhuǎn)染的明星細(xì)胞293T為例，它生長(zhǎng)較快，但貼壁能力弱，容易出現(xiàn)成片脫落。解決辦法是提前用明膠包被板子，增強(qiáng)吸附性，還可以使用TC處理的培養(yǎng)瓶/皿促進(jìn)細(xì)胞貼壁。 02 培養(yǎng)條件不適合 293T細(xì)胞推薦使用DMEM（高糖）+10%FBS培養(yǎng)基，如果用錯(cuò)培養(yǎng)基，細(xì)胞可能生長(zhǎng)不良甚至漂浮。解決辦法是參照細(xì)胞使用說(shuō)明書或?qū)嶒?yàn)室預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用合適的培養(yǎng)體系。 03 復(fù)蘇過(guò)程中操作不當(dāng) 復(fù)蘇時(shí)水溫太低或太高都會(huì)損傷細(xì)胞。正確方法是從液氮罐中取出凍存管，立即放入37℃水槽中快速解凍，搖晃凍存管，確保1分鐘內(nèi)完成解凍。 04 去除凍存液中殘留的DMSO過(guò)程，離心對(duì)細(xì)胞造成損傷 為防止DMSO毒性，很多小伙伴會(huì)離心去除上清，但這會(huì)損傷脆弱的細(xì)胞。解決辦法是解凍后直接接種在培養(yǎng)皿內(nèi)，隔天再換新鮮培養(yǎng)基去除DMSO。 2️⃣ PART.02 傳代后細(xì)胞漂浮較多 01 胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 不同貼壁細(xì)胞的黏附能力不同，293T細(xì)胞消化時(shí)間為2-3分鐘，A549細(xì)胞系則為5-6分鐘。解決辦法是縮短胰酶消化時(shí)間，以顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓為標(biāo)準(zhǔn)。 02 過(guò)度吹打細(xì)胞帶來(lái)機(jī)械損傷 吹打細(xì)胞時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或用力過(guò)度會(huì)帶來(lái)機(jī)械應(yīng)力。解決辦法是胰酶使用前復(fù)溫，以顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓為標(biāo)準(zhǔn)，減少吹打次數(shù)和時(shí)間。 03 培養(yǎng)條件不適合 同PART.01 “細(xì)胞漂浮”問(wèn)題解答。 04 細(xì)胞接種密度過(guò)高 細(xì)胞多，培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分不足。解決辦法是細(xì)胞重懸均勻，推薦1:3或1:4的比例傳代，接種后水平均勻晃動(dòng)培養(yǎng)皿，保證細(xì)胞均勻分布。 3️⃣ PART.03 細(xì)胞生長(zhǎng)太慢 01 細(xì)胞接種密度過(guò)低 細(xì)胞數(shù)量少，營(yíng)養(yǎng)成分充足但生長(zhǎng)慢。解決辦法是根據(jù)細(xì)胞數(shù)量調(diào)整傳代比例，適當(dāng)增加接種細(xì)胞的初始濃度。 02 培養(yǎng)基配置/使用/保存不當(dāng) 培養(yǎng)基在室溫放置過(guò)久或血清批次問(wèn)題會(huì)導(dǎo)致效能下降。解決辦法是注意各組分保存溫度及性狀是否正常，使用效能穩(wěn)定的血清。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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