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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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瓊脂糖凝膠電泳超詳細(xì)攻略
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做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，瓊脂糖凝膠電泳可是必備技能 1️⃣ 原理：分子篩效應(yīng)+電泳原理 瓊脂糖凝膠電泳，聽(tīng)起來(lái)高大上，其實(shí)原理超簡(jiǎn)單！瓊脂糖是從藻類里提取的多糖，把它加熱溶解在緩沖溶液里，冷卻后就形成凝膠啦。這個(gè)凝膠有很多小孔，孔徑大小跟瓊脂糖濃度有關(guān)，濃度越高，孔就越小。 當(dāng)核酸分子在電場(chǎng)里穿過(guò)凝膠時(shí)，小分子能快速通過(guò)小孔，大分子就被卡住，移動(dòng)得慢。這就像是篩子一樣，把不同大小的核酸分子分開(kāi)啦。而且核酸分子帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)里會(huì)往正極跑，這就讓它們分得更清楚啦。 2️⃣ 構(gòu)造：四大關(guān)鍵部件 電泳槽：這是電泳的“主場(chǎng)”，上下兩部分，上部放凝膠，下部裝緩沖液。電泳槽兩端連著正負(fù)極電極，給核酸分子提供“跑道”。 凝膠托盤：用來(lái)制備凝膠，上面有梳子狀的樣品槽模板，凝膠冷卻后拔掉梳子，就形成了樣品槽。 電源：給電泳提供穩(wěn)定的直流電場(chǎng)，電壓和電流可調(diào)，控制核酸分子的“奔跑速度”。 緩沖液：維持穩(wěn)定的pH值和離子強(qiáng)度，讓核酸分子在電場(chǎng)中順利遷移。 3️⃣ 步驟：手把手教你做實(shí)驗(yàn) ① 制備瓊脂糖凝膠 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，稱取適量瓊脂糖粉末，加入緩沖液，加熱溶解，倒入凝膠托盤，插入梳子，冷卻凝固后拔掉梳子，樣品槽就做好啦。 ② 準(zhǔn)備樣品 把待分離的核酸樣品加入上樣緩沖液，混合均勻。上樣緩沖液里有甘油讓樣品沉下去，還有染料方便觀察。 ③ 上樣與電泳 把凝膠放入電泳槽，加入緩沖液，用微量移液器把樣品加入樣品槽，注意別有氣泡哦。連接電源，設(shè)置合適的電壓和時(shí)間，核酸分子就會(huì)在電場(chǎng)作用下往正極跑啦。 ④ 染色與觀察 電泳結(jié)束后，把凝膠放入染色液中染色，再用蒸餾水漂洗。最后把凝膠放在紫外透射儀上，就能看到不同大小的核酸分子形成的條帶啦。 4️⃣ 電壓和時(shí)間：影響分離效果的關(guān)鍵 電壓：電壓越高，核酸分子跑得越快，但過(guò)高會(huì)使凝膠發(fā)熱，降低分離效果。一般電壓在5 - 10V/cm之間。 電泳時(shí)間：時(shí)間越長(zhǎng)，核酸分子跑得越遠(yuǎn)，但過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致條帶模糊。一般30 - 60分鐘就足夠啦。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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