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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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瓊脂糖凝膠電泳超詳細(xì)攻略
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做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),瓊脂糖凝膠電泳可是必備技能 1️⃣ 原理:分子篩效應(yīng)+電泳原理 瓊脂糖凝膠電泳,聽起來高大上,其實(shí)原理超簡(jiǎn)單!瓊脂糖是從藻類里提取的多糖,把它加熱溶解在緩沖溶液里,冷卻后就形成凝膠啦。這個(gè)凝膠有很多小孔,孔徑大小跟瓊脂糖濃度有關(guān),濃度越高,孔就越小。 當(dāng)核酸分子在電場(chǎng)里穿過凝膠時(shí),小分子能快速通過小孔,大分子就被卡住,移動(dòng)得慢。這就像是篩子一樣,把不同大小的核酸分子分開啦。而且核酸分子帶負(fù)電荷,在電場(chǎng)里會(huì)往正極跑,這就讓它們分得更清楚啦。 2️⃣ 構(gòu)造:四大關(guān)鍵部件 電泳槽:這是電泳的“主場(chǎng)”,上下兩部分,上部放凝膠,下部裝緩沖液。電泳槽兩端連著正負(fù)極電極,給核酸分子提供“跑道”。 凝膠托盤:用來制備凝膠,上面有梳子狀的樣品槽模板,凝膠冷卻后拔掉梳子,就形成了樣品槽。 電源:給電泳提供穩(wěn)定的直流電場(chǎng),電壓和電流可調(diào),控制核酸分子的“奔跑速度”。 緩沖液:維持穩(wěn)定的pH值和離子強(qiáng)度,讓核酸分子在電場(chǎng)中順利遷移。 3️⃣ 步驟:手把手教你做實(shí)驗(yàn) ① 制備瓊脂糖凝膠 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,稱取適量瓊脂糖粉末,加入緩沖液,加熱溶解,倒入凝膠托盤,插入梳子,冷卻凝固后拔掉梳子,樣品槽就做好啦。 ② 準(zhǔn)備樣品 把待分離的核酸樣品加入上樣緩沖液,混合均勻。上樣緩沖液里有甘油讓樣品沉下去,還有染料方便觀察。 ③ 上樣與電泳 把凝膠放入電泳槽,加入緩沖液,用微量移液器把樣品加入樣品槽,注意別有氣泡哦。連接電源,設(shè)置合適的電壓和時(shí)間,核酸分子就會(huì)在電場(chǎng)作用下往正極跑啦。 ④ 染色與觀察 電泳結(jié)束后,把凝膠放入染色液中染色,再用蒸餾水漂洗。最后把凝膠放在紫外透射儀上,就能看到不同大小的核酸分子形成的條帶啦。 4️⃣ 電壓和時(shí)間:影響分離效果的關(guān)鍵 電壓:電壓越高,核酸分子跑得越快,但過高會(huì)使凝膠發(fā)熱,降低分離效果。一般電壓在5 - 10V/cm之間。 電泳時(shí)間:時(shí)間越長(zhǎng),核酸分子跑得越遠(yuǎn),但過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致條帶模糊。一般30 - 60分鐘就足夠啦。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容:分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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