 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1139 | 回復(fù): 0 | |||
津渡津渡的生科捐助貴賓 (初入文壇)
|
[交流]
細(xì)胞蛋白如何提取，簡(jiǎn)化版步驟來(lái)了（附注意事項(xiàng)和閉坑指南）
|
|
一、細(xì)胞蛋白提取全流程 1. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 - 裂解液：RIPA裂解液（含1%蛋白酶抑制劑+1%磷酸酶抑制劑，現(xiàn)用現(xiàn)配）； - 預(yù)冷設(shè)備：離心機(jī)（4℃）、冰盒、預(yù)冷PBS、凍存管； - 耗材：細(xì)胞刮刀（或胰酶消化法）、200μL/1.5mL EP管。 2.操作步驟 - A [棄培養(yǎng)基] --> B [預(yù)冷PBS洗2次]； - B --> C [加入裂解液 <br>（6孔板：每孔100μL）] ； - C --> D [冰上裂解30min <br> 每10min渦旋震蕩15s]； - D --> E [4℃12000g 離心15min]； - E --> F [吸取上清至新EP管]； - F --> G [-80℃分裝保存]。 二、致命失誤閉坑指南 - 裂解液用量：細(xì)胞鋪滿80%的6孔板 → 100μL/孔（過(guò)多導(dǎo)致蛋白稀釋，過(guò)少裂解不充分）； - 抑制劑失效：蛋白酶抑制劑需-20℃避光保存，解凍后24h內(nèi)用完； - 離心溫度：必須預(yù)冷離心機(jī)至4℃，否則蛋白降解。 三、關(guān)鍵注意事項(xiàng) - 抑制降解：全程在冰上操作（裂解液接觸細(xì)胞前必須預(yù)冷）； - 避免泡沫：渦旋震蕩時(shí)勿產(chǎn)生氣泡（導(dǎo)致蛋白變性）； - 核酸污染：高粘度樣本需加DNase/RNase（否則WB條帶拖尾）。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
289求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
化工282求調(diào)劑一志愿211
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向
已經(jīng)有25人回復(fù)
-
材料085601一志愿哈工大317
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料與化工，291，求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
材料調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
085600材料與化工，一志愿廣州985，求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
中科大材料299求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 津渡津渡的生科 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工，291，求調(diào)劑 +7 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-05 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | 曼殊2266 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
材料學(xué)學(xué)碩308分/本科東北大學(xué)/一志愿西北工業(yè)大學(xué)/
 5+3
|
蘇堯幺幺 2026-03-03 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 泡了個(gè)椒 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 267化工調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 學(xué)碩材料275調(diào)劑 +9 | 路三三 2026-03-03 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 一志愿東北大學(xué) 279分求調(diào)劑 +4 | 聶樂(lè)平 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大080500總分324求調(diào)劑 +3 | jorna 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | Y?l?h 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿西工大材料學(xué)，英一數(shù)二總分321分，求調(diào)劑。 +3 | zz05zz 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600求調(diào)劑 +4 | LRZZZZZZ 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工335求調(diào)劑 +5 | 摸摸貓貓頭 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑。一志愿報(bào)考鄭州大學(xué)化學(xué)工藝學(xué)碩，總分295分 +8 | yl1 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +9 | 材紫有化 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)材料與化工325求調(diào)劑 +5 | 半截的詩(shī)0927 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南理工大學(xué)材料與化工326分，求調(diào)劑 +3 | wujinrui1 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 哈工大計(jì)算機(jī)劉劼團(tuán)隊(duì)招生 +4 | hit_aiot 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +6 | 田智友 2026-02-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | aaadim 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 亭亭亭01 2026-03-01 | 6/300 |
|