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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞培養(yǎng)小技巧：如何讓細(xì)胞“變漂亮”？
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做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，是不是經(jīng)常遇到細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則、狀態(tài)差，甚至傳代后細(xì)胞越來(lái)越“丑”的問(wèn)題？別擔(dān)心，今天就來(lái)給大家分享幾個(gè)讓細(xì)胞“變漂亮”的小技巧！ 一、細(xì)胞也有“脾氣”，環(huán)境很重要！ 細(xì)胞就像小朋友，不同的細(xì)胞有不同的“脾氣”，它們喜歡的環(huán)境也各不相同。有些細(xì)胞喜歡“熱鬧”，比如內(nèi)皮細(xì)胞，數(shù)量多一點(diǎn)時(shí)生長(zhǎng)得更好；而有些細(xì)胞喜歡“清靜”，比如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞，數(shù)量少一點(diǎn)狀態(tài)反而更好。巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)速度超快，貼壁也快，傳代時(shí)要留很少量細(xì)胞，不然細(xì)胞形態(tài)就會(huì)變差。所以，寶子們?cè)陴B(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候，一定要摸清楚它們的“脾氣”，找到合適的生長(zhǎng)空間密度哦！ 二、細(xì)胞狀態(tài)不好？來(lái)個(gè)“美容SPA”！ 如果細(xì)胞形態(tài)不好，或者看起來(lái)有點(diǎn)“臟”，別急，可以給它們做個(gè)“美容SPA”！對(duì)于貼壁細(xì)胞，可以試試下面的方法： 第一步：清洗 倒掉舊培養(yǎng)基，加入3ml PBS輕輕洗滌一次，再用滴管吸走。然后再加入3ml PBS預(yù)吹打一次，輕輕沿著瓶底吹一遍，吸走。這一步就像是給細(xì)胞“洗臉”，把表面的雜質(zhì)清理干凈。 第二步：正式消化 開始正式的消化和吹打。把吹打下來(lái)的細(xì)胞懸液加入新的培養(yǎng)瓶，事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。記得按時(shí)觀察細(xì)胞貼壁情況，10分鐘、20分鐘、30分鐘各觀察一次。等到部分細(xì)胞貼壁后，迅速倒出培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基輕輕洗一次。這一步就像是給細(xì)胞“敷面膜”，讓它們更好地適應(yīng)新環(huán)境。 第三步：后續(xù)培養(yǎng) 加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。如果一次效果不理想，可以重復(fù)多次，直到細(xì)胞形態(tài)完美。記得結(jié)合細(xì)胞的“脾氣”，對(duì)于有密度依賴性的細(xì)胞，等貼壁細(xì)胞多一點(diǎn)再傳代；反之則少一點(diǎn)。 對(duì)于懸浮細(xì)胞，如果有很多死細(xì)胞或細(xì)胞碎片，可以用離心法分離。吹散細(xì)胞后用離心管收集，離心后活細(xì)胞在上層，死細(xì)胞和碎片在下層。去掉上清，加入新鮮培養(yǎng)基輕輕吹打上層細(xì)胞，然后接種到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)。這樣就能把“壞細(xì)胞”清理掉，讓“好細(xì)胞”繼續(xù)生長(zhǎng)啦！ 三、傳代消化：細(xì)胞的“生死考驗(yàn)”！ 傳代消化是細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵步驟，也是細(xì)胞狀態(tài)變差的常見原因。每次消化都像是對(duì)細(xì)胞的一次“生死考驗(yàn)”，如果操作不當(dāng)，細(xì)胞就會(huì)受到損傷，越長(zhǎng)越差。為了避免這種情況，可以試試“四步消化法”： 第一步：清洗 倒掉舊培養(yǎng)基，加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍，把漂浮的死細(xì)胞洗掉。這是“前奏”，目的是清理雜質(zhì)。 第二步：吹打 加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，把貼壁不牢固的細(xì)胞吹下來(lái)，再用培養(yǎng)基清洗一遍。兩次所得懸液混合傳入新瓶。這一步可以觀察細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感度。 第三步：胰酶消化 吸干凈瓶?jī)?nèi)剩余液體，加入2ml PBS潤(rùn)洗一遍，吸掉棄之。再加入1ml左右的胰酶消化。顯微鏡下觀察，待細(xì)胞間隙明顯時(shí)，立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打2-3遍，懸液傳入新瓶。這一步可以最大程度地把細(xì)胞吹打成單個(gè)狀態(tài)。 第四步：繼續(xù)消化 把第三步吸出來(lái)的胰酶重新加入瓶?jī)?nèi)，繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。顯微鏡下觀察，待細(xì)胞獨(dú)立開來(lái)時(shí)，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打，懸液傳入新瓶培養(yǎng)。這一步可以確保所有細(xì)胞都被均勻處理。 四、總結(jié)：耐心和技巧，讓細(xì)胞“變漂亮”！ 細(xì)胞培養(yǎng)雖然有點(diǎn)復(fù)雜，但只要用心，就能讓細(xì)胞“變漂亮”。不同的細(xì)胞有不同的“脾氣”，要找到合適的生長(zhǎng)環(huán)境；細(xì)胞狀態(tài)不好時(shí)，可以給它們做個(gè)“美容SPA”；傳代消化時(shí)，要小心操作，避免損傷細(xì)胞。只要掌握了這些技巧，細(xì)胞就會(huì)乖乖地生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)也會(huì)更順利！ 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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