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活/死細胞雙染色試劑盒實驗原理
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活 / 死細胞雙染色試劑盒通常利用兩種不同的熒光染料，基于細胞的細胞膜完整性等特性來區(qū)分活細胞和死細胞，以下是其常見的實驗原理： 基于細胞膜完整性差異 活細胞染色原理：活細胞的細胞膜具有完整的選擇性通透屏障功能。一些熒光染料，如 Calcein-AM，本身無熒光且為親脂性，能夠自由穿過完整的細胞膜進入細胞內(nèi)。進入細胞后，細胞內(nèi)的酯酶會將 Calcein-AM 水解，去除 AM 基團，生成具有綠色熒光的 Calcein。由于活細胞內(nèi)有豐富的酯酶且細胞膜完整，水解后的 Calcein 無法透出細胞膜，會在細胞內(nèi)積累，從而使活細胞呈現(xiàn)綠色熒光。 死細胞染色原理：死細胞的細胞膜通透性發(fā)生改變，失去了選擇性通透能力。例如碘化丙啶（PI）等染料，在正常情況下不能透過活細胞的細胞膜，但可以自由進入死細胞。PI 能與細胞內(nèi)的核酸（主要是 DNA）結(jié)合，在激發(fā)光的作用下發(fā)出紅色熒光，從而使死細胞被染成紅色。 基于細胞內(nèi)酶活性差異 活細胞染色原理：一些試劑盒利用活細胞內(nèi)特有的酶活性來標記活細胞。比如熒光素二乙酸酯（FDA），它可被活細胞內(nèi)的非特異性酯酶水解，產(chǎn)生具有熒光的熒光素，使活細胞發(fā)出熒光。活細胞內(nèi)的這種酶活性較高，能夠快速將 FDA 轉(zhuǎn)化為有熒光的產(chǎn)物，從而實現(xiàn)對活細胞的特異性染色。 死細胞染色原理：與活細胞不同，死細胞由于細胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，細胞內(nèi)的酶活性會發(fā)生顯著變化甚至喪失。在利用酶活性差異進行染色的體系中，死細胞無法像活細胞那樣對相應的熒光底物進行有效代謝轉(zhuǎn)化，也就無法產(chǎn)生或只能產(chǎn)生極微弱的熒光信號，從而與活細胞區(qū)分開來。 基于線粒體膜電位差異 活細胞染色原理：活細胞的線粒體具有正常的膜電位，一些陽離子熒光染料，如 JC-1，在進入活細胞后，會由于線粒體膜電位的存在而聚集在線粒體基質(zhì)中，形成聚合物，這些聚合物能夠發(fā)出紅色熒光。所以，具有正常線粒體膜電位的活細胞會顯示紅色熒光。 死細胞染色原理：當細胞死亡時，線粒體膜電位會去極化，喪失正常的電位差。此時，JC-1 不能聚集在線粒體中形成聚合物，而是以單體形式存在于細胞內(nèi)，單體的 JC-1 發(fā)出綠色熒光。因此，死細胞會呈現(xiàn)綠色熒光，以此與活細胞相區(qū)別。 分享 活/死細胞雙染色試劑盒實驗步驟 活/死細胞雙染色試劑盒的儲存條件和有效期是多久？ 活/死細胞雙染色試劑盒可以用于哪些細胞類型的染色？ |
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