 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1788 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
大鼠褪黑素（MT）定量檢測試劑盒（ELISA）使用指南
|
|
大鼠褪黑素（MT）定量檢測試劑盒（ELISA）使用指南 大鼠褪黑素（MT）定量檢測試劑盒（ELISA）專為科研工作者設(shè)計，用于定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液及組織中的大鼠褪黑素（MT）含量。在使用本試劑盒前，請務(wù)必仔細研讀本說明書。 實驗原理 本試劑盒采用競爭 ELISA 法。預(yù)先包被褪黑素（MT）抗體的微孔板中，依次加入樣本 / 校準品和 Asaay Diluent，溫育洗滌后，加入 SA - HRP 再次溫育。經(jīng)二次洗滌，加入底物 TMB 顯色，室溫反應(yīng)后用終止液終止，通過讀取 OD 值實現(xiàn)檢測。OD 值與樣品中褪黑素（MT）含量呈負相關(guān)。該試劑盒具備靈敏度高、特異性強、重復(fù)性好、操作簡便快速等優(yōu)勢，對血清中褪黑素（MT）含量的變化具備可靠的檢出能力。 試劑盒限制 本試劑盒僅用于科研，嚴禁用于臨床診斷。 請在試劑盒標示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品切勿使用。 請勿與其他廠家的試劑盒或組分混用。 若樣品需稀釋，可使用 PBS（PH7.4）。 若樣本值高于最高標準品濃度，需適當(dāng)稀釋后重新測定。 檢測前需排除待測樣本中可能存在的異嗜抗體對檢測結(jié)果的干擾。 本試劑盒測定結(jié)果與通過其他方法得到的結(jié)果不具有直接可比性。 技術(shù)提示 混合蛋白溶液時，注意避免起泡。 加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分懸臂加樣，防止交叉污染。 確保合適的溫育時間和充分的洗滌步驟，以保證實驗結(jié)果的準確性。 使用自動洗板機時，加入 30 秒浸泡步驟可提高檢測精度。 底物溶液應(yīng)為無色液體，若保存過程中變?yōu)樗{色，表明已失效，不可使用。 終止液加樣順序與底物溶液一致，加入后藍色底物產(chǎn)物會瞬間變?yōu)辄S色。 實驗用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋密封，低溫干燥保存。 所有液體組分使用前需充分搖勻，嚴格按說明書的時間、加樣量及順序進行溫育操作。 試劑盒組分與保存 未開封的試劑盒應(yīng)保存在 2 - 8℃，過期試劑盒禁止使用。其組分包括： 校準品：0.5ml / 管 * 6 管，由抗原配制的 6 個濃度標準品，濃度依次為 80、40、20、10、5、0pg/mL。 包被微孔板：有 96T/48T 規(guī)格，預(yù)包被固相抗體。 SA - HRP：12mL，為 HRP 標記物。 Asaay Diluent：12mL，用于分離 MT 與結(jié)合蛋白。 TMB：12mL，TMB 工作液。 終止液：12mL，2mol/L 稀釋液。 20× 濃縮洗滌液：30mL，含 0.15% Tween20 的 PBS。 說明書：1 份。 自封袋：1 個。 不干膠：2 片。 其他用品 實驗需準備酶標儀（450nm）、精密移液器及一次性吸頭、蒸餾水、洗瓶或者自動洗板機、37℃水浴鍋或恒溫箱、500ml 量筒。 生物安全 檢測需符合實驗室管理規(guī)范，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和廢棄物都應(yīng)按傳染物處置。 試劑盒液體組分含 proclin - 300 防腐劑，可能引起皮膚過敏，避免吸入煙霧與皮膚接觸。 底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激，避免吸入煙霧。 實驗時應(yīng)戴上防護手套，完成后徹底洗手。 樣品的采集和儲存 細胞培養(yǎng)上清：4000rpm 離心 20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存于 - 20℃以下，避免反復(fù)凍融。 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作避免細胞刺激，4000rpm 離心 20min 分離血清，保存于 - 20℃以下，避免反復(fù)凍融。 血漿：用肝素、EDTA 或檸檬酸鈉抗凝，4000rpm 離心 20 分鐘取上清，保存于 - 20℃以下，避免反復(fù)凍融。 組織：用預(yù)冷的 PBS (0.01 M,pH = 7.4) 沖洗組織，去殘留血液，稱重剪碎。按 1 : 9（可調(diào)整）體積比與 PBS（含蛋白酶抑制劑）在冰上研磨，可超聲破碎或反復(fù)凍融，5000×g 離心 5 - 10 分鐘取上清檢測。 樣本在 2 - 8℃可儲存 72h，或在 - 20℃儲存 6 個月。若樣本收集后未一次檢測完，需按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時室溫解凍并確保均勻充分。 檢驗方法操作程序 將試劑移至室溫平衡兩小時，按當(dāng)批檢測數(shù)量，用蒸餾水 1：20 稀釋濃縮洗滌液，混勻備用。 取出預(yù)包被板，設(shè)空白對照孔（不加液體），每個校準品設(shè) 2 孔，每孔加對應(yīng)校準品 15μl，其余檢測孔加待測血清或質(zhì)控品 15μl。 除空白孔外，所有孔加 Asaay Diluent 100μl，混勻，貼封板膜，37℃溫育 60 分鐘。 洗板： 手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，注滿洗滌液，靜置 10 秒甩干，重復(fù) 3 次后拍干。 洗板機洗板：選擇洗滌 3 次程序洗板后拍干。 每孔加 SA - HRP 100μl（空白對照孔除外），混勻，貼封板膜，37℃溫育 30 分鐘。 重復(fù)第 4 步洗板操作。 每孔加 TMB 100μl，振蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘，每孔加終止液 100μl。用酶標儀在 450nm 波長下，先以空白對照孔調(diào)零點，再測定各孔光密度值（OD 值）。 結(jié)果計算 檢測完成后，以標準品濃度為縱坐標，對應(yīng)的吸光度（OD 值）為橫坐標，利用計算機軟件采用四參數(shù) Logistic 曲線擬合（4 - pl）創(chuàng)建標準曲線方程。通過樣本的吸光度（OD 值），利用方程計算樣品濃度值。若樣品被稀釋，測得的濃度值需乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品最終濃度。 試劑盒性能指標 物理性能：液體組分應(yīng)澄清，無沉淀或絮狀物，所有組分包裝無破損，各組分裝量不少于要求。 劑量反應(yīng)曲線線性：用四參數(shù) Logistic 曲線擬合（4 - pl），劑量 - 反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)（r）的絕對值不低于 0.9900。 精密度： 批內(nèi)精密度：三組高、中、低濃度樣品在同一板塊內(nèi)進行二十次精度評估，批內(nèi)變異系數(shù) CV% 小于 15%。 批間精密度：三組高、中、低濃度樣品在不同板塊內(nèi)進行二十次精度評估，批間變異系數(shù) CV% 小于 15%。 靈敏度：最低檢出限不高于 0.1pg/mL。 回收率：三組高、中、低濃度樣品在同一板塊內(nèi)進行五次回收率評估，回收率在 85% - 115% 之間。 穩(wěn)定性：2℃ - 8℃保存，有效期 6 個月。 檢測范圍：5 pg/mL – 80 pg/mL 。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
264求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
085600 材料與化工 298
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
0854總分272
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
EST拒稿重投
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計算機、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報考
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
0703化學(xué)學(xué)碩 288分
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
接收調(diào)劑
已經(jīng)有23人回復(fù)
-
化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
304分材料專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 青云1234 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計算機、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報考 +8 | pin8023 2026-02-28 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 接收調(diào)劑 +15 | 津萌津萌 2026-03-02 | 23/1150 |
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +4 | Afy123456 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿中海洋 +3 | lour. 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[基金申請] 沒有青基直接申請面上，感覺自己瘋了 +5 | kevin63t 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿東北大學(xué)化學(xué)314分求調(diào)劑 +5 | lr1212.. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化工專碩348，一志愿985求調(diào)劑 +8 | 弗格個 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研]
 計算機學(xué)碩 分數(shù)285求調(diào)劑
+4
|
glwshine 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 080500材料科學(xué)與工程 +4 | 202114020319 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +4 | wxz2 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +6 | wyyyqx 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +3 | 少71.8 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +11 | yunziaaaaa 2026-03-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑一志愿東北林業(yè)大學(xué)材料與化工英二數(shù)二 +5 | 蟲蟲蟲蟲蟲7 2026-03-01 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 261求調(diào)劑 +3 | 陸lh 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +8 | yang婷 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 13853210211 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
一志愿中南大學(xué)理學(xué)化學(xué)
+4
|
15779376950 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +9 | 南迦720 2026-02-28 | 10/500 |
|