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| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者子不語1977將贈送您 5 個金幣 | ||
子不語1977新蟲 (小有名氣)
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[求助]
Crispr敲除擬南芥能在Basta篩選下長出來但是靶點未被編輯
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遇到的問題如題 使用的擬南芥是一個OE株系（Hyg抗性），一個雙突株系（無抗性），在這兩個基礎(chǔ)上分別轉(zhuǎn)入帶Basta抗性的crispr質(zhì)粒敲除基因。crispr質(zhì)粒是劉耀光院士實驗室的PYLCRISPR/Cas9 Pubi-B質(zhì)粒。通過浸花法得到的種子差不多每一兩萬顆出一顆能在Basta篩選下生長的陽性苗。跑設(shè)計在靶點附近上下游300bp引物獲得的PCR產(chǎn)物經(jīng)過測序發(fā)現(xiàn)靶點未被編輯。同時再用Basta篩選下生長的陽性苗提的DNA去跑Cas9-F/R，有很弱的條帶，如圖（將Cas9-F/R引物輸入UB質(zhì)粒圖譜，對應(yīng)產(chǎn)物大小為572bp） 請問我該如何解決靶點未被編輯的這個問題 |
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