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huangyan.88.新蟲 (小有名氣)
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乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移動物模型
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2024年09月20日 17:43 河北 聽全文 乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，其病死率居女性癌癥首位。盡管現(xiàn)在的醫(yī)療水平提高了乳腺癌的檢出率及治療效果，但是仍然有部分患者不能從中獲益，其主要原因是乳腺癌發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)是機體重要的外周免疫器官，在免疫方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，當(dāng)細(xì)菌或病毒入侵人體時，淋巴結(jié)能夠抵抗及清除外來異物，減少機體出現(xiàn)感染性疾病的風(fēng)險。然而，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，癌細(xì)胞能夠進(jìn)入淋巴管再通過淋巴液遷移到引流淋巴結(jié)中，并且在引流淋巴結(jié)中增殖，使引流淋巴結(jié)發(fā)生病變，甚至還能從引流淋巴結(jié)中逃逸擴散到其他器官。臨床上，淋巴結(jié)的狀態(tài)作為分期預(yù)后因素的診斷價值已被廣泛重視，并且對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否以及轉(zhuǎn)移程度的評價將決定患者的后續(xù)治療。 目前針對建立腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的動物模型主要有舌下接種法、腳掌接種法、睪丸內(nèi)接種法、骨髓內(nèi)接種法、背部接種法及耳部接種法等。 01 實驗動物 BALB /c雌性小鼠，6～8周齡，體質(zhì)量約為20g； 小鼠乳腺腫瘤病毒介導(dǎo)多瘤病毒中間T抗原（mouse mammary tumor virus polyoma middle T antigen，MMTV-PyMT）轉(zhuǎn)基因小鼠（乳腺癌小鼠），6～8周齡，體質(zhì)量約為20g。 02 模型構(gòu)建 PyMT小鼠自發(fā)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型 原理： MMTV-PyMT轉(zhuǎn)基因小鼠模型是通過植入PyMT基因到乳腺特異性啟動子腺病毒(MMTV)的表達(dá)載體中建立的。乳腺特異性啟動子的作用使得PyMT基因在小鼠乳腺組織中高表達(dá)，從而使小鼠出現(xiàn)乳腺腫瘤的表型。利用該小鼠自發(fā)乳腺癌的特性來觀察其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移規(guī)律。 PyMT小鼠自發(fā)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型在小鼠出生8周取材，通過對病理切片進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)該淋巴結(jié)形成了明顯的巢狀腫瘤，結(jié)構(gòu)破壞明顯，濾泡數(shù)量減少，髓竇形態(tài)明顯改變，可以看到淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞形成了明顯的分界線。 優(yōu)點： MMTV-PyMT轉(zhuǎn)基因小鼠模型具有自發(fā)性轉(zhuǎn)移、可重復(fù)性和接近病理狀態(tài)的特點。且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為100%，成瘤率也為100%，直接選用PyMT小鼠就能滿足實驗要求，無需其他實驗操作，但選擇該模型進(jìn)行研究時耗費的成本遠(yuǎn)高于其他自發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移模型，同時該模型用于研究腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時腫瘤負(fù)荷較大，且可能形成多個腫瘤，不利于后續(xù)相關(guān)實驗的進(jìn)行。 應(yīng)用： 其是一個理想的乳腺癌淋巴結(jié)自發(fā)轉(zhuǎn)移研究模型。 小鼠腹股溝淋巴結(jié)-對側(cè)淋巴結(jié)模型 將BALB/c小鼠后肢腹部和腿部備毛后，對小鼠進(jìn)行麻醉處理，使用無菌剪刀和鑷子在其腹股溝處剪開約1cm的小口，取4T1細(xì)胞懸液5μL，共計5×100000個細(xì)胞，使用一次性無菌胰島素注射針將細(xì)胞懸液接種于小鼠腹股溝處淋巴結(jié)中。在細(xì)胞懸液進(jìn)入淋巴結(jié)后，可觀察到淋巴結(jié)明顯凸起，以此確定腫瘤細(xì)胞懸液在小鼠淋巴結(jié)內(nèi)注射成功。 荷瘤后7d開始監(jiān)測，每2天觀察腫瘤的生長情況及小鼠狀態(tài)。待小鼠生存狀況差或腫瘤負(fù)荷大于2000mm3時麻醉處死小鼠。取材，做病理切片，觀察淋巴結(jié)內(nèi)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生變化，以此確定是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 優(yōu)缺點：荷瘤時間比較長。該荷瘤模型的操作方法難度較大，荷瘤成功率僅為50%，該模型的構(gòu)建對操作者技術(shù)要求較高，重復(fù)性較低，易操作失誤形成皮下瘤，不能成功建立模型。 應(yīng)用：腹股溝淋巴結(jié)-對側(cè)淋巴結(jié)模型更適用于當(dāng)淋巴結(jié)被腫瘤細(xì)胞侵襲后，其在抗腫瘤免疫中發(fā)揮的作用等相關(guān)研究。 小鼠腿部-腹股溝淋巴結(jié)模型 取4T1細(xì)胞懸液100μL，含5×100000個細(xì)胞，使用一次性無菌胰島素注射針皮下接種于BALB/c小鼠左后肢大腿處。荷瘤后7d開始監(jiān)測，每2天觀察腫瘤的生長情況及小鼠狀態(tài)。待小鼠生存狀況差或腫瘤負(fù)荷大于2000mm3時麻醉處死小鼠。取材，做病理切片，觀察淋巴結(jié)內(nèi)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生變化，以此確定是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 優(yōu)缺點：該模型操作簡單，成瘤率為100%，重復(fù)性好，但發(fā)生轉(zhuǎn)移的時間較長，接近腫瘤晚期，不利于后續(xù)實驗的進(jìn)行 后腳掌-腘窩淋巴結(jié)模型 取4T1細(xì)胞懸液50μL，含5×100000個細(xì)胞，使用一次性無菌胰島素注射針皮下接種于BALB/c小鼠左后肢腳掌。 荷瘤后7d開始監(jiān)測，每2天觀察腫瘤的生長情況及小鼠狀態(tài)。待小鼠生存狀況差或腫瘤負(fù)荷大于2000mm3時麻醉處死小鼠。取材，做病理切片，觀察淋巴結(jié)內(nèi)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生變化，以此確定是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 應(yīng)用：適合用于乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移基礎(chǔ)實驗研究。 舌下-頸內(nèi)靜脈肩胛舌骨肌淋巴結(jié)模型 用鑷子將麻醉后的BALB/c小鼠舌頭固定，取4T1細(xì)胞懸液50μL，含5×100000個細(xì)胞，使用一次性無菌胰島素注射針接種于BALB/c小鼠舌左緣黏膜下。 荷瘤后7d開始監(jiān)測，每2天觀察腫瘤的生長情況及小鼠狀態(tài)。待小鼠生存狀況差或腫瘤負(fù)荷大于2000mm3時麻醉處死小鼠。取材，做病理切片，觀察淋巴結(jié)內(nèi)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生變化，以此確定是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 優(yōu)缺點：根據(jù)病理切片的結(jié)果顯示，小鼠淋巴結(jié)正常形態(tài)存在，無腫瘤細(xì)胞侵襲，同時荷瘤小鼠的前哨淋巴結(jié)（SLN）與正常小鼠淋巴結(jié)（Control）質(zhì)量無明顯變化。此外，該荷瘤模型成瘤后易引起小鼠進(jìn)食困難，從而導(dǎo)致小鼠消瘦，在荷瘤的第9天造成小鼠死亡，存活時間短不利于后續(xù)其他實驗的進(jìn)行。 骨髓內(nèi)-腹股溝淋巴結(jié)模型 取4T1細(xì)胞懸液8μL，含5×100000個細(xì)胞，使用一次性無菌胰島素注射針接種于麻醉后的BALB/c小鼠后肢腿脛骨中。 優(yōu)缺點：此種方法在構(gòu)建淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移小鼠模型上不易成功。該種方法的成瘤率為70%，較其他荷瘤方式成瘤率低。 右上背皮-腋窩淋巴結(jié)模型 取4T1細(xì)胞懸液100μL，含5×100000個細(xì)胞，使用一次性無菌胰島素注射針皮下接種于BALB/c小鼠右上背皮下。 優(yōu)缺點：此荷瘤方式簡單，成瘤率可達(dá)100%，但腫瘤細(xì)胞向腋窩淋巴結(jié)的侵襲較緩慢，在荷瘤后17d依然未見淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)、形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞 |
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