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huangyan.88.新蟲 (小有名氣)
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乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移動物模型
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2024年09月20日 17:43 河北 聽全文 乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，其病死率居女性癌癥首位。盡管現(xiàn)在的醫(yī)療水平提高了乳腺癌的檢出率及治療效果，但是仍然有部分患者不能從中獲益，其主要原因是乳腺癌發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠端轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)是機體重要的外周免疫器官，在免疫方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，當細菌或病毒入侵人體時，淋巴結(jié)能夠抵抗及清除外來異物，減少機體出現(xiàn)感染性疾病的風險。然而，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，癌細胞能夠進入淋巴管再通過淋巴液遷移到引流淋巴結(jié)中，并且在引流淋巴結(jié)中增殖，使引流淋巴結(jié)發(fā)生病變，甚至還能從引流淋巴結(jié)中逃逸擴散到其他器官。臨床上，淋巴結(jié)的狀態(tài)作為分期預(yù)后因素的診斷價值已被廣泛重視，并且對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否以及轉(zhuǎn)移程度的評價將決定患者的后續(xù)治療。 目前針對建立腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的動物模型主要有舌下接種法、腳掌接種法、睪丸內(nèi)接種法、骨髓內(nèi)接種法、背部接種法及耳部接種法等。 01 實驗動物 BALB /c雌性小鼠，6～8周齡，體質(zhì)量約為20g； 小鼠乳腺腫瘤病毒介導(dǎo)多瘤病毒中間T抗原（mouse mammary tumor virus polyoma middle T antigen，MMTV-PyMT）轉(zhuǎn)基因小鼠（乳腺癌小鼠），6～8周齡，體質(zhì)量約為20g。 02 模型構(gòu)建 PyMT小鼠自發(fā)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型 原理： MMTV-PyMT轉(zhuǎn)基因小鼠模型是通過植入PyMT基因到乳腺特異性啟動子腺病毒(MMTV)的表達載體中建立的。乳腺特異性啟動子的作用使得PyMT基因在小鼠乳腺組織中高表達，從而使小鼠出現(xiàn)乳腺腫瘤的表型。利用該小鼠自發(fā)乳腺癌的特性來觀察其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移規(guī)律。 PyMT小鼠自發(fā)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型在小鼠出生8周取材，通過對病理切片進行分析后發(fā)現(xiàn)該淋巴結(jié)形成了明顯的巢狀腫瘤，結(jié)構(gòu)破壞明顯，濾泡數(shù)量減少，髓竇形態(tài)明顯改變，可以看到淋巴細胞與腫瘤細胞形成了明顯的分界線。 優(yōu)點： MMTV-PyMT轉(zhuǎn)基因小鼠模型具有自發(fā)性轉(zhuǎn)移、可重復(fù)性和接近病理狀態(tài)的特點。且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為100%，成瘤率也為100%，直接選用PyMT小鼠就能滿足實驗要求，無需其他實驗操作，但選擇該模型進行研究時耗費的成本遠高于其他自發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移模型，同時該模型用于研究腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時腫瘤負荷較大，且可能形成多個腫瘤，不利于后續(xù)相關(guān)實驗的進行。 應(yīng)用： 其是一個理想的乳腺癌淋巴結(jié)自發(fā)轉(zhuǎn)移研究模型。 小鼠腹股溝淋巴結(jié)-對側(cè)淋巴結(jié)模型 將BALB/c小鼠后肢腹部和腿部備毛后，對小鼠進行麻醉處理，使用無菌剪刀和鑷子在其腹股溝處剪開約1cm的小口，取4T1細胞懸液5μL，共計5×100000個細胞，使用一次性無菌胰島素注射針將細胞懸液接種于小鼠腹股溝處淋巴結(jié)中。在細胞懸液進入淋巴結(jié)后，可觀察到淋巴結(jié)明顯凸起，以此確定腫瘤細胞懸液在小鼠淋巴結(jié)內(nèi)注射成功。 荷瘤后7d開始監(jiān)測，每2天觀察腫瘤的生長情況及小鼠狀態(tài)。待小鼠生存狀況差或腫瘤負荷大于2000mm3時麻醉處死小鼠。取材，做病理切片，觀察淋巴結(jié)內(nèi)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生變化，以此確定是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 優(yōu)缺點：荷瘤時間比較長。該荷瘤模型的操作方法難度較大，荷瘤成功率僅為50%，該模型的構(gòu)建對操作者技術(shù)要求較高，重復(fù)性較低，易操作失誤形成皮下瘤，不能成功建立模型。 應(yīng)用：腹股溝淋巴結(jié)-對側(cè)淋巴結(jié)模型更適用于當淋巴結(jié)被腫瘤細胞侵襲后，其在抗腫瘤免疫中發(fā)揮的作用等相關(guān)研究。 小鼠腿部-腹股溝淋巴結(jié)模型 取4T1細胞懸液100μL，含5×100000個細胞，使用一次性無菌胰島素注射針皮下接種于BALB/c小鼠左后肢大腿處。荷瘤后7d開始監(jiān)測，每2天觀察腫瘤的生長情況及小鼠狀態(tài)。待小鼠生存狀況差或腫瘤負荷大于2000mm3時麻醉處死小鼠。取材，做病理切片，觀察淋巴結(jié)內(nèi)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生變化，以此確定是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 優(yōu)缺點：該模型操作簡單，成瘤率為100%，重復(fù)性好，但發(fā)生轉(zhuǎn)移的時間較長，接近腫瘤晚期，不利于后續(xù)實驗的進行 后腳掌-腘窩淋巴結(jié)模型 取4T1細胞懸液50μL，含5×100000個細胞，使用一次性無菌胰島素注射針皮下接種于BALB/c小鼠左后肢腳掌。 荷瘤后7d開始監(jiān)測，每2天觀察腫瘤的生長情況及小鼠狀態(tài)。待小鼠生存狀況差或腫瘤負荷大于2000mm3時麻醉處死小鼠。取材，做病理切片，觀察淋巴結(jié)內(nèi)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生變化，以此確定是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 應(yīng)用：適合用于乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移基礎(chǔ)實驗研究。 舌下-頸內(nèi)靜脈肩胛舌骨肌淋巴結(jié)模型 用鑷子將麻醉后的BALB/c小鼠舌頭固定，取4T1細胞懸液50μL，含5×100000個細胞，使用一次性無菌胰島素注射針接種于BALB/c小鼠舌左緣黏膜下。 荷瘤后7d開始監(jiān)測，每2天觀察腫瘤的生長情況及小鼠狀態(tài)。待小鼠生存狀況差或腫瘤負荷大于2000mm3時麻醉處死小鼠。取材，做病理切片，觀察淋巴結(jié)內(nèi)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生變化，以此確定是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 優(yōu)缺點：根據(jù)病理切片的結(jié)果顯示，小鼠淋巴結(jié)正常形態(tài)存在，無腫瘤細胞侵襲，同時荷瘤小鼠的前哨淋巴結(jié)（SLN）與正常小鼠淋巴結(jié)（Control）質(zhì)量無明顯變化。此外，該荷瘤模型成瘤后易引起小鼠進食困難，從而導(dǎo)致小鼠消瘦，在荷瘤的第9天造成小鼠死亡，存活時間短不利于后續(xù)其他實驗的進行。 骨髓內(nèi)-腹股溝淋巴結(jié)模型 取4T1細胞懸液8μL，含5×100000個細胞，使用一次性無菌胰島素注射針接種于麻醉后的BALB/c小鼠后肢腿脛骨中。 優(yōu)缺點：此種方法在構(gòu)建淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移小鼠模型上不易成功。該種方法的成瘤率為70%，較其他荷瘤方式成瘤率低。 右上背皮-腋窩淋巴結(jié)模型 取4T1細胞懸液100μL，含5×100000個細胞，使用一次性無菌胰島素注射針皮下接種于BALB/c小鼠右上背皮下。 優(yōu)缺點：此荷瘤方式簡單，成瘤率可達100%，但腫瘤細胞向腋窩淋巴結(jié)的侵襲較緩慢，在荷瘤后17d依然未見淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)、形態(tài)發(fā)生改變，細胞 |
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