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huangyan.88.新蟲(chóng) (小有名氣)
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Western blot | 條帶問(wèn)題千千萬(wàn)，舊的不去新的又來(lái)
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蛋白免疫印跡( Western Blot) 是將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特異性抗體檢測(cè)某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù),現(xiàn)己廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達(dá)研究、抗體活性檢測(cè)和疾病早期診斷等多個(gè)方面。 蛋白實(shí)驗(yàn)雖然簡(jiǎn)單，但是條帶容易出現(xiàn)的問(wèn)題極多，下面來(lái)分享一下不同條帶的原因和解決辦法 出現(xiàn)不均勻的白色斑點(diǎn)的原因 轉(zhuǎn)膜時(shí)有氣泡 膜上抗體分布不均勻 解決辦法 轉(zhuǎn)膜前小心去除氣泡 抗體孵育時(shí)保持搖動(dòng) 條帶的“微笑”效應(yīng)的原因 遷移過(guò)快 電泳時(shí)溫度過(guò)高 解決辦法 優(yōu)化電泳條件 降低電泳溫度，在冰上操作 條帶分布不均勻的原因 可能和抗體有關(guān) 可能孵育時(shí)振蕩不均勻 抗體和封閉液不結(jié)合 解決辦法 更換二抗 確保孵育過(guò)程中膜完全浸沒(méi)在抗體中，孵育時(shí)確保搖晃均勻 嘗試更換封閉液 條帶問(wèn)題千千萬(wàn)，以上內(nèi)容只涉及小部分原因和解決辦法，還有很多其他因素。總之，有時(shí)候步驟正確可能是操作手法的問(wèn)題，建議大家做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候嚴(yán)謹(jǐn)一點(diǎn)，祝大家實(shí)驗(yàn)順利。 d9620332600324b7d0b763908aa121c.png |
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