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Western blot | 條帶問題千千萬，舊的不去新的又來
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蛋白免疫印跡( Western Blot) 是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質檢測技術,現(xiàn)己廣泛應用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。 蛋白實驗雖然簡單，但是條帶容易出現(xiàn)的問題極多，下面來分享一下不同條帶的原因和解決辦法 出現(xiàn)不均勻的白色斑點的原因 轉膜時有氣泡 膜上抗體分布不均勻 解決辦法 轉膜前小心去除氣泡 抗體孵育時保持搖動 條帶的“微笑”效應的原因 遷移過快 電泳時溫度過高 解決辦法 優(yōu)化電泳條件 降低電泳溫度，在冰上操作 條帶分布不均勻的原因 可能和抗體有關 可能孵育時振蕩不均勻 抗體和封閉液不結合 解決辦法 更換二抗 確保孵育過程中膜完全浸沒在抗體中，孵育時確保搖晃均勻 嘗試更換封閉液 條帶問題千千萬，以上內容只涉及小部分原因和解決辦法，還有很多其他因素�？傊袝r候步驟正確可能是操作手法的問題，建議大家做實驗的時候嚴謹一點，祝大家實驗順利。 d9620332600324b7d0b763908aa121c.png |
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