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fightingbj新蟲(chóng) (初入文壇)
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蛋白激酶胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域原核表達(dá)純化 蛋白質(zhì)出現(xiàn)在菌體沉淀中該怎么純化 已有1人參與
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蛋白原核表達(dá)不出來(lái)，有沒(méi)有什么辦法？ 本人最近在做磷酸化實(shí)驗(yàn)，目前在純化一個(gè)激酶，將kinase domain（跨膜結(jié)構(gòu)域已去除）的序列構(gòu)建到GST載體中，200ml培養(yǎng)基的菌體用50ml裂解液重懸破碎后離心，拷染發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)僅在菌體破碎后的沉淀中檢測(cè)到，在上清中檢測(cè)不到，用的是rosetta菌株，有沒(méi)有大神指導(dǎo)一下這種情況該怎么純化，非常感謝！ 之前也用過(guò)pET-28a載體純化，也是同樣的情況。 |
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4樓2025-12-23 20:37:38
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