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一生二生三新蟲 (初入文壇)
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[求助]
液相色譜方法驗(yàn)證 已有1人參與
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求助各位老師，關(guān)于高效液相色譜子檢測生物樣品，我有幾個問題想問一下 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線一系列濃度點(diǎn)都是成比例增加或稀釋的，但是總要從一個濃度開始操作吧，那怎么選這個對照品濃度去做標(biāo)準(zhǔn)曲線呢，每個文獻(xiàn)都不一樣，有什么依據(jù)嗎？ 2、是要隨便進(jìn)一個對照品濃度和進(jìn)樣量，然后去看信噪比>10找一個差不多的濃度把這個當(dāng)做定量限，再選大于這濃度3-5倍的濃度當(dāng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)嗎？ 3、那又怎么確保自己設(shè)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線是可以把血漿樣品待測物濃度范圍包含住呢？我看有的論壇說是先估算自己樣品濃度，但是這個不就是做實(shí)驗(yàn)要出來的結(jié)果嗎，怎么自己提前預(yù)估呢？ 4、在方法學(xué)驗(yàn)證第一步專屬性時，就要加入相對應(yīng)的對照品和內(nèi)標(biāo)，那這時候怎么確定加入對照品個內(nèi)標(biāo)的量和濃度呢？有什么依據(jù)嗎？ 是不是一開始就要定下來標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度和內(nèi)標(biāo)濃度然后再做專屬性？ 5、我試著隨便選濃度和劑量，進(jìn)了一個只有對照品（1mg／ml）和內(nèi)標(biāo)（0.1mg/ml）的混合樣品，但是都雜糅在一起了，而且血漿雜峰也是在前面幾分鐘出，這是不是意味著我的對照品和內(nèi)標(biāo)都不適合這個實(shí)驗(yàn)了？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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1. 這其實(shí)跟第三點(diǎn)是一個問題，就怎么確定待測物濃度范圍，兩種方式：一、既然做了這個樣品總有設(shè)計(jì)濃度吧，就按設(shè)計(jì)濃度去算；二、拿待測物測下試試撒，不就知道了么。標(biāo)曲的目標(biāo)是覆蓋整個待測物濃度范圍，所以從哪個濃度點(diǎn)開始成比例增加或稀釋都行，沒有嚴(yán)格的說法，怎么方便怎么來，能達(dá)到目的就行。 2. 這個問題有點(diǎn)迷，信噪比跟濃度成某種線性關(guān)系是明確的，所以只要進(jìn)一針已知濃度的標(biāo)液，基本就能推算出定量限的濃度；至于標(biāo)曲的最低濃度只要能覆蓋待測物濃度就好了啊，最低就是到定量限濃度咯，如果待測物存在檢不出的可能性，線性就得做到定量限。 3. 見1。 4. 加多少內(nèi)標(biāo)物得看內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)情況，一般保證響應(yīng)跟待測物接近就行。做專屬性不一定要確定濃度，畢竟一般情況下專屬性跟濃度不相關(guān)，但是在分離度不理想的情況下就得考慮濃度了。 5. 圖上好歹標(biāo)一下峰是哪個撒，如果目標(biāo)峰跟內(nèi)標(biāo)峰分不開那是做不了內(nèi)標(biāo)了，目標(biāo)峰跟內(nèi)標(biāo)峰都得有良好的分離度 |
2樓2024-06-07 11:31:13
一生二生三
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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- 帖子: 19
- 在線: 1.2小時
- 蟲號: 35460638
- 注冊: 2024-06-02
- 專業(yè): 檔案學(xué)
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謝謝老師，我進(jìn)了一個空白血漿的，一個相同濃度的內(nèi)標(biāo)和對照品在空白血漿的，下面是色譜圖，空白里第4分鐘有雜峰，我的內(nèi)標(biāo)也是在第四個峰，這樣是不是就分不開沒辦法證明專屬性了，而且后面的對照品有點(diǎn)脫峰不知道是不是和雜峰沒分開，請問老師這個方法還需要再優(yōu)化嗎，藥動液相目標(biāo)峰有峰寬對稱性和分離度的要求嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2024-06-08 15:23:43
4樓2024-06-11 14:01:34
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