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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 化學化工區(qū) » 分析 » 色譜質譜 » 液相色譜方法驗證
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[求助]
液相色譜方法驗證 已有1人參與
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求助各位老師，關于高效液相色譜子檢測生物樣品，我有幾個問題想問一下 1、標準曲線一系列濃度點都是成比例增加或稀釋的，但是總要從一個濃度開始操作吧，那怎么選這個對照品濃度去做標準曲線呢，每個文獻都不一樣，有什么依據(jù)嗎？ 2、是要隨便進一個對照品濃度和進樣量，然后去看信噪比>10找一個差不多的濃度把這個當做定量限，再選大于這濃度3-5倍的濃度當做標準曲線最低點嗎？ 3、那又怎么確保自己設置的標準曲線是可以把血漿樣品待測物濃度范圍包含住呢？我看有的論壇說是先估算自己樣品濃度，但是這個不就是做實驗要出來的結果嗎，怎么自己提前預估呢？ 4、在方法學驗證第一步專屬性時，就要加入相對應的對照品和內標，那這時候怎么確定加入對照品個內標的量和濃度呢？有什么依據(jù)嗎？ 是不是一開始就要定下來標準曲線濃度和內標濃度然后再做專屬性？ 5、我試著隨便選濃度和劑量，進了一個只有對照品（1mg／ml）和內標（0.1mg/ml）的混合樣品，但是都雜糅在一起了，而且血漿雜峰也是在前面幾分鐘出，這是不是意味著我的對照品和內標都不適合這個實驗了？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應助回帖
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1. 這其實跟第三點是一個問題，就怎么確定待測物濃度范圍，兩種方式：一、既然做了這個樣品總有設計濃度吧，就按設計濃度去算；二、拿待測物測下試試撒，不就知道了么。標曲的目標是覆蓋整個待測物濃度范圍，所以從哪個濃度點開始成比例增加或稀釋都行，沒有嚴格的說法，怎么方便怎么來，能達到目的就行。 2. 這個問題有點迷，信噪比跟濃度成某種線性關系是明確的，所以只要進一針已知濃度的標液，基本就能推算出定量限的濃度；至于標曲的最低濃度只要能覆蓋待測物濃度就好了啊，最低就是到定量限濃度咯，如果待測物存在檢不出的可能性，線性就得做到定量限。 3. 見1。 4. 加多少內標物得看內標物的響應情況，一般保證響應跟待測物接近就行。做專屬性不一定要確定濃度，畢竟一般情況下專屬性跟濃度不相關，但是在分離度不理想的情況下就得考慮濃度了。 5. 圖上好歹標一下峰是哪個撒，如果目標峰跟內標峰分不開那是做不了內標了，目標峰跟內標峰都得有良好的分離度 |
2樓2024-06-07 11:31:13
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謝謝老師，我進了一個空白血漿的，一個相同濃度的內標和對照品在空白血漿的，下面是色譜圖，空白里第4分鐘有雜峰，我的內標也是在第四個峰，這樣是不是就分不開沒辦法證明專屬性了，而且后面的對照品有點脫峰不知道是不是和雜峰沒分開，請問老師這個方法還需要再優(yōu)化嗎，藥動液相目標峰有峰寬對稱性和分離度的要求嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2024-06-08 15:23:43
4樓2024-06-11 14:01:34
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