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科研顧問_Gu新蟲 (小有名氣)
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[交流]
干貨分享 | 如何判斷qPCR數(shù)據(jù)能不能用？
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大家好，今天聊下做的aPCR數(shù)據(jù)可以進行分析，能不能用這個問題，判斷 qPCR 數(shù)據(jù)是否可用需要考慮以下幾個方面： 擴增曲線：擴增曲線應該呈現(xiàn)出典型的 S 型曲線，且曲線應該平滑，沒有明顯的鋸齒狀或平臺期。 閾值線：閾值(threshold)一般是基線的標準偏差的10倍。閾值線應該位于擴增曲線的指數(shù)增長期，且應該在曲線的中部，不應過高或過低。 CT 值：CT 值(循環(huán)閾值)是指擴增曲線達到閾值線所需的循環(huán)數(shù)。CT 值應該在合理的范圍內(nèi)，一般來說，CT 值應該在 15-35 之間。 內(nèi)參基因：如果實驗中使用了內(nèi)參基因，內(nèi)參基因的 CT 值應該穩(wěn)定且在合理范圍內(nèi)。 重復性：qPCR 實驗應該具有良好的重復性，即相同條件下重復實驗得到的結(jié)果應該相似。 溶解曲線：單峰無雜峰，TM在75-90之間。 如果 qPCR 數(shù)據(jù)滿足以上要求，則可以認為數(shù)據(jù)可用。如果數(shù)據(jù)存在異�；虿环弦�，則需要進一步分析原因并采取相應的措施，如優(yōu)化實驗條件、重新實驗等。 |
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