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科研顧問(wèn)_Gu新蟲(chóng) (小有名氣)
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干貨分享 | 如何判斷qPCR數(shù)據(jù)能不能用?
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大家好,今天聊下做的aPCR數(shù)據(jù)可以進(jìn)行分析,能不能用這個(gè)問(wèn)題,判斷 qPCR 數(shù)據(jù)是否可用需要考慮以下幾個(gè)方面: 擴(kuò)增曲線:擴(kuò)增曲線應(yīng)該呈現(xiàn)出典型的 S 型曲線,且曲線應(yīng)該平滑,沒(méi)有明顯的鋸齒狀或平臺(tái)期。 閾值線:閾值(threshold)一般是基線的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。閾值線應(yīng)該位于擴(kuò)增曲線的指數(shù)增長(zhǎng)期,且應(yīng)該在曲線的中部,不應(yīng)過(guò)高或過(guò)低。 CT 值:CT 值(循環(huán)閾值)是指擴(kuò)增曲線達(dá)到閾值線所需的循環(huán)數(shù)。CT 值應(yīng)該在合理的范圍內(nèi),一般來(lái)說(shuō),CT 值應(yīng)該在 15-35 之間。 內(nèi)參基因:如果實(shí)驗(yàn)中使用了內(nèi)參基因,內(nèi)參基因的 CT 值應(yīng)該穩(wěn)定且在合理范圍內(nèi)。 重復(fù)性:qPCR 實(shí)驗(yàn)應(yīng)該具有良好的重復(fù)性,即相同條件下重復(fù)實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果應(yīng)該相似。 溶解曲線:?jiǎn)畏鍩o(wú)雜峰,TM在75-90之間。 如果 qPCR 數(shù)據(jù)滿足以上要求,則可以認(rèn)為數(shù)據(jù)可用。如果數(shù)據(jù)存在異;虿环弦,則需要進(jìn)一步分析原因并采取相應(yīng)的措施,如優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件、重新實(shí)驗(yàn)等。 |
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