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[求助]
CAR-T細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)求助
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最近做了一個CAR-T細(xì)胞，然后做體外細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其效果，CAR-T有殺傷效果，但是對照的T細(xì)胞組也出現(xiàn)了殺傷效果，兩次實(shí)驗(yàn)都是這種結(jié)果，不知道問題出在哪里 實(shí)驗(yàn)流程是這樣的： 第一天：從健康成年人采集血液，分離出PBMC，使用XVIVO15培養(yǎng)基（5%自體血清 +1000UI/mL 白介素2）培養(yǎng)到第二天 第二天：將培養(yǎng)的PBMC平分成兩份，分別加入與細(xì)胞數(shù)量相等的CD3/CD28磁珠（gibco），繼續(xù)培養(yǎng)到第三天 第三天：一分PBMC加入含car的慢病毒，moi為8，polybrene 8μg/mL，另一份PBMC不加任何東西，都放在離心機(jī)中 2000g 32℃ 離心2小時，離心結(jié)束后直接放回培養(yǎng)箱 第四天：將兩份細(xì)胞吹勻或使用刮刀，分別收集后離心，然后重新使用XVIVO15重懸，繼續(xù)培養(yǎng) 第五六天：根據(jù)培養(yǎng)基消耗狀態(tài)，補(bǔ)充培養(yǎng)基 第七天：除去細(xì)胞中的CD3/CD28磁珠，繼續(xù)培養(yǎng) 第八天：收集足夠的T細(xì)胞和CAR-T細(xì)胞用于細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)（RTCA法） 我個人感覺問題出在去除CD3/CD28磁珠到細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)的時間太短，磁珠加強(qiáng)了T細(xì)胞的非特異殺傷 |
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