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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 免疫實驗 » CAR-T細胞殺傷實驗求助
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[求助]
CAR-T細胞殺傷實驗求助
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最近做了一個CAR-T細胞，然后做體外細胞殺傷實驗驗證其效果，CAR-T有殺傷效果，但是對照的T細胞組也出現(xiàn)了殺傷效果，兩次實驗都是這種結果，不知道問題出在哪里 實驗流程是這樣的： 第一天：從健康成年人采集血液，分離出PBMC，使用XVIVO15培養(yǎng)基（5%自體血清 +1000UI/mL 白介素2）培養(yǎng)到第二天 第二天：將培養(yǎng)的PBMC平分成兩份，分別加入與細胞數(shù)量相等的CD3/CD28磁珠（gibco），繼續(xù)培養(yǎng)到第三天 第三天：一分PBMC加入含car的慢病毒，moi為8，polybrene 8μg/mL，另一份PBMC不加任何東西，都放在離心機中 2000g 32℃ 離心2小時，離心結束后直接放回培養(yǎng)箱 第四天：將兩份細胞吹勻或使用刮刀，分別收集后離心，然后重新使用XVIVO15重懸，繼續(xù)培養(yǎng) 第五六天：根據(jù)培養(yǎng)基消耗狀態(tài)，補充培養(yǎng)基 第七天：除去細胞中的CD3/CD28磁珠，繼續(xù)培養(yǎng) 第八天：收集足夠的T細胞和CAR-T細胞用于細胞殺傷實驗（RTCA法） 我個人感覺問題出在去除CD3/CD28磁珠到細胞殺傷實驗的時間太短，磁珠加強了T細胞的非特異殺傷 |
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