 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 596 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
DNA提取試劑盒的操作方法
|
|
全套操作約需1小時(shí)，分勻漿、細(xì)胞裂解、除蛋白、DNA純化等步驟，詳細(xì)說明如下。勻漿和細(xì)胞裂解: 使用不同的實(shí)驗(yàn)材料需采用不同的勻漿步驟，具體說明如下：【從動(dòng)物組織中提取基因組DNA】使用研缽進(jìn)行勻漿時(shí)：① 取1～100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中，快速用力展研成勻漿。注）下列組織請(qǐng)加液氮研磨至粉末狀。A．富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。B．富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。C．富含角質(zhì)蛋白的組織或堅(jiān)硬的組織（如骨骼）等。② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，溫和研磨30秒鐘。注）使用上述①-注）的實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，請(qǐng)?jiān)诩尤隨olution A及RNase A1后，將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿液移至Collection Tube中。如果勻漿體積不足650 μl，請(qǐng)補(bǔ)充Solution A至650 μl，65℃保溫5分鐘。使用研磨棒進(jìn)行勻漿時(shí):① 取1～100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊狀。② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成勻漿。③ 加入350 μl的Solution A將研磨棒上的勻漿沖入Collection Tube中，充分振蕩混合后，65℃保溫5分鐘�！緩闹参锊牧匣蛑参锱囵B(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA】① 按下表稱取適量的新鮮植物材料（如選用的是冷凍干燥植物材料，則用量減半），剪成小塊放入研缽中，加入液氮，待樣品冷凍完全后快速、用力研磨至粉末狀。研磨時(shí)應(yīng)間斷加入液氮以防止材料融化。植物材料種類植物材料使用量*植物花、葉片10～100 mg植物莖60～240 mg植物根80～240 mg植物種子80～240 mg * 如選取植物的根、種子等樣品時(shí)，因其基因組DNA含量很低，需使用超過表格中所示的參數(shù)用量，此時(shí)請(qǐng)分兩管進(jìn)行步驟1～6的實(shí)驗(yàn)操作，在步驟7的操作中再將各管溶液分次加入至同一Spin Column中過濾，使各管的基因組DNA結(jié)合到同一個(gè)Spin Column上。如從培養(yǎng)的植物細(xì)胞中提取基因組DNA，請(qǐng)離心收集2×103～1×107的培養(yǎng)植物細(xì)胞，加入150 μl水充分懸浮細(xì)胞后移入研缽中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末狀。注）樣品研磨應(yīng)充分，否則將會(huì)嚴(yán)重影響基因組DNA的收率。② 將研缽移至65℃水浴，當(dāng)樣品粉末剛開始融化時(shí)，向研缽中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿移至Collection Tube中。如勻漿體積不足650 μl，請(qǐng)補(bǔ)充Solution A至650 μl。65℃保溫15分鐘。注）處理富含纖維的根/莖等植物材料或富含淀粉、蛋白質(zhì)的種子等時(shí)，可延長水浴時(shí)間至60分鐘。 【從全血中提取基因組DNA】① 取10～250 μl的全血（含抗凝劑）加入至Collection Tube中。② 加入500 μl的Solution A。③ 加入1 μl的RNase A1，激烈振蕩15秒鐘后，冰浴5分鐘。注） 人與動(dòng)物的抗凝全血的一次處理量為≤250 μl；禽類、兩棲類的抗凝全血的一次處理量為≤10 μl。 【從培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA】三.使用懸浮培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞時(shí)：① 使用Collection Tube收集1×105～1.5×107的細(xì)胞懸浮液，5,000 rpm離心5分鐘，棄上清（細(xì)胞培養(yǎng)液）。② 加入150 μl的滅菌蒸餾水或PBS懸浮細(xì)胞。③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1，激烈振蕩15秒鐘，然后室溫靜置1分鐘。 四.使用貼壁細(xì)胞時(shí)：① 棄盡培養(yǎng)液，向培養(yǎng)皿中加入650 μl的Solution A，室溫靜置1分鐘。注）96孔板等的每個(gè)孔中一次容納不了650 μl 溶液時(shí)，請(qǐng)分?jǐn)?shù)次處理細(xì)胞。② 用移液槍的槍頭吹落貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，取650 μl的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至Collection Tube中。③ 加入0.8 μl的RNase A1，激烈振蕩15秒鐘，然后室溫靜置1分鐘。2. 加入400 μl的Solution B，振蕩混合。3. 加入1 ml的4℃預(yù)冷的Solution C，充分混勻后，12,000 rpm離心2分鐘。4. 棄去上層有機(jī)相，再加入1 ml的4℃預(yù)冷的Solution C，充分混勻后，12,000 rpm離心2分鐘。5. 棄去上層有機(jī)相，然后將水相溶液（無色下層）轉(zhuǎn)移至置于Collection Tube上的Filter Cup中，12,000 rpm離心1分鐘。注）有機(jī)相（上層）帶有顏色，請(qǐng)務(wù)必除盡，否則會(huì)阻礙DNA結(jié)合到DNA制備膜上。相間沉淀不必考慮，在過濾時(shí)將被去除。6. 棄Filter Cup，在濾液中加入400 μl的DB Buffer，混合均勻。7. 將試劑盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。將上述操作6混合溶液轉(zhuǎn)移至Spin Column中，12,000 rpm離心1分鐘，棄濾液。8. 將500 μl的Rinse A加入至Spin Column中，12,000 rpm離心30秒鐘，棄濾液。9. 將700 μl的Rinse B加入至Spin Column中，12,000 rpm離心30秒鐘，棄濾液。注）請(qǐng)沿Spin Column管壁四周加入Rinse B，這樣有助于完全沖洗沾附于管壁上的鹽份。10. 重復(fù)操作步驟9。11. 將Spin Column安置于新的1.5 ml的離心管上，在Spin Column膜的中央處加入50～200 μl的滅菌蒸餾水或Elution Buffer，室溫靜置1分鐘。注）把滅菌蒸餾水或Elution Buffer加熱至65℃使用時(shí)有利于提高洗脫效率。12. 12, 000 rpm離心1分鐘洗脫DNA。如果實(shí)驗(yàn)室備有適合于Spin Column接口的負(fù)壓裝置，可從上述操作步驟6完成以后進(jìn)行以下操作。 公眾號(hào)：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
0857求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
295求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿中南大學(xué)理學(xué)化學(xué)
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
085600 材料與化工 298
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
281求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
0856材料與化工，270求調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
331求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿鄭州大學(xué)，學(xué)碩，物理化學(xué)， 333求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
成果系統(tǒng)訪問量大，請(qǐng)15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請(qǐng)諒解。
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
0703化學(xué) 一志愿東北大學(xué) 279分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Sh畢合生物 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[論文投稿]
EST拒稿重投
 5+3
|
15102603076 2026-03-02 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +4 | Afy123456 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
[考研] 266材料化工求調(diào)劑 +3 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 江蘇省農(nóng)科院招調(diào)劑1名 +5 | Qwertyuop 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 沒有青基直接申請(qǐng)面上，感覺自己瘋了 +5 | kevin63t 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 267求調(diào)劑 +6 | 釣魚佬as 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703求調(diào)劑 學(xué)碩 理/工科均可 總分279 +3 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 26考研報(bào)考西工大材料308分求調(diào)劑 +4 | weizhong123 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281電子信息求調(diào)劑 +3 | jhtfeybgj 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料工程求調(diào)劑 +3 | 1431251 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +6 | wyyyqx 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿]
通訊作者寫誰，問題是你意想不到的問題
15+3
|
阿爾法啊 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +4 | Ricardo1113 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料調(diào)劑 +5 | 沿岸有貝殼OUC 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 306分材料調(diào)劑 +5 | chuanzhu川燭 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328求調(diào)劑 +3 | 。，。，。，。i 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +10 | 天下熯 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 簡木ChuFront 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +9 | 南迦720 2026-02-28 | 10/500 |
|