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科研狗的日常吖新蟲 (初入文壇)
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熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)（FISH）步驟詳解和注意事項(xiàng)
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FISH檢測領(lǐng)域，尤其是在疾病分型領(lǐng)域，探針大多采用直標(biāo)型設(shè)計(jì)。 6，能對同一樣本進(jìn)行多次的FISH操作嗎？ 在多數(shù)情況下，如果FISH操作沒有得到正常的結(jié)果，我們可以將探針洗去，然后使用同樣的探針進(jìn)行再次的雜交。如果我們使用的是直標(biāo)型探針，還可以使用不同探針對同一樣本進(jìn)行反復(fù)雜交。針對不同的樣本，處理方法略有不同。 外周血樣本的處理： 1、使用鑷子小心地揭去雜交區(qū)的蓋玻片 2、將樣本片浸泡于70％、85％和100％的乙醇中各一分鐘以便充分地脫水。將片子風(fēng)干后就可以進(jìn)行重復(fù)的雜交了。二次雜交中建議將變性的時間縮短一半，但不得少于3分鐘。如果對同一樣本還要進(jìn)行三次雜交，變性的時間就無需減少了。對于多次雜交，復(fù)染液濃度的降低有利于保持探針的亮度。 曾有報(bào)道在同一樣本片上進(jìn)行了多達(dá)8次的FISH操作。也可對已經(jīng)進(jìn)行G帶顯色的樣本片進(jìn)行FISH操作：將樣本片浸泡于70％、85％和100％的乙醇中各二分鐘以便充分地脫水。將片子風(fēng)干后就可以進(jìn)行重復(fù)的雜交了。 二次雜交中建議將變性的時間縮短一半，但不得少于3分鐘。如果對同一樣本還要進(jìn)行三次雜交，變性的時間就無需減少了。 7， FISH技術(shù)有哪些主要優(yōu)勢？ ① 安全、快速、靈敏度高； ② 探針能較長時間保存； ③ 多色標(biāo)記，簡單直觀； ④ 可用于中期染色體及間期細(xì)胞的分析； ⑤ 可應(yīng)用于新鮮、冷凍或石蠟包埋標(biāo)本以及穿刺物和脫落細(xì)胞等多種物質(zhì)的檢測。 8，原位雜交技術(shù)的發(fā)展前景如何？ FISH 技術(shù)作為連接分子生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)的橋梁地位已為世人所公認(rèn)。 盡管目前FISH技術(shù)無法達(dá)到百分百完全雜交，特別是在應(yīng)用較短cDNA探針時存在雜交效率明顯下降的問題，但隨著各種新型分子探針以及更為精密高端的光學(xué)顯微鏡和功能強(qiáng)大的計(jì)算機(jī)分析系統(tǒng)的不斷問世，上述問題將會逐步得到解決，該技術(shù)的作用正變得日益重要，應(yīng)用領(lǐng)域也得以不斷擴(kuò)展。FISH技術(shù)在泌尿系統(tǒng)腫瘤研究領(lǐng)域的巨大潛力與光明前景將引領(lǐng)我們進(jìn)入全新時代。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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