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熒光原位雜交實驗（FISH）步驟詳解和注意事項
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FISH檢測領域，尤其是在疾病分型領域，探針大多采用直標型設計。 6，能對同一樣本進行多次的FISH操作嗎？ 在多數情況下，如果FISH操作沒有得到正常的結果，我們可以將探針洗去，然后使用同樣的探針進行再次的雜交。如果我們使用的是直標型探針，還可以使用不同探針對同一樣本進行反復雜交。針對不同的樣本，處理方法略有不同。 外周血樣本的處理： 1、使用鑷子小心地揭去雜交區(qū)的蓋玻片 2、將樣本片浸泡于70％、85％和100％的乙醇中各一分鐘以便充分地脫水。將片子風干后就可以進行重復的雜交了。二次雜交中建議將變性的時間縮短一半，但不得少于3分鐘。如果對同一樣本還要進行三次雜交，變性的時間就無需減少了。對于多次雜交，復染液濃度的降低有利于保持探針的亮度。 曾有報道在同一樣本片上進行了多達8次的FISH操作。也可對已經進行G帶顯色的樣本片進行FISH操作：將樣本片浸泡于70％、85％和100％的乙醇中各二分鐘以便充分地脫水。將片子風干后就可以進行重復的雜交了。 二次雜交中建議將變性的時間縮短一半，但不得少于3分鐘。如果對同一樣本還要進行三次雜交，變性的時間就無需減少了。 7， FISH技術有哪些主要優(yōu)勢？ ① 安全、快速、靈敏度高； ② 探針能較長時間保存； ③ 多色標記，簡單直觀； ④ 可用于中期染色體及間期細胞的分析； ⑤ 可應用于新鮮、冷凍或石蠟包埋標本以及穿刺物和脫落細胞等多種物質的檢測。 8，原位雜交技術的發(fā)展前景如何？ FISH 技術作為連接分子生物學與細胞生物學的橋梁地位已為世人所公認。 盡管目前FISH技術無法達到百分百完全雜交，特別是在應用較短cDNA探針時存在雜交效率明顯下降的問題，但隨著各種新型分子探針以及更為精密高端的光學顯微鏡和功能強大的計算機分析系統(tǒng)的不斷問世，上述問題將會逐步得到解決，該技術的作用正變得日益重要，應用領域也得以不斷擴展。FISH技術在泌尿系統(tǒng)腫瘤研究領域的巨大潛力與光明前景將引領我們進入全新時代。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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