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lyfdxb鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
細(xì)胞搖瓶在液體菌種生產(chǎn)中的應(yīng)用-富道細(xì)胞
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作為一種細(xì)胞培養(yǎng)耗材，細(xì)胞搖瓶廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域，在液體菌種生產(chǎn)中也用到了細(xì)胞搖瓶，其生產(chǎn)流程如下： 1、培養(yǎng)基制備 馬鈴薯250克，洗凈削皮加水1500毫升煮至熟而不爛，四層紗布過(guò)濾取汁1000毫升，然后加入葡萄糖20克，蛋白胨2克，磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂1克，維生素B1兩片，消泡濟(jì)0·3毫升，煮至完全溶解以后停止加熱。 2、裝瓶 將煮好的液體菌種培養(yǎng)基靜止，等待其中固態(tài)物沉淀以后取上清液裝細(xì)胞搖瓶，裝瓶的時(shí)候需要注意的是要用漏斗放到細(xì)胞搖瓶上，然后將培養(yǎng)液延漏斗倒入瓶?jī)?nèi)，防止?fàn)I養(yǎng)液粘到瓶口或接近瓶口的瓶壁上。裝入量為細(xì)胞搖瓶標(biāo)注量的60%即可。 3、制作封口棉塞 塞細(xì)胞搖瓶瓶口的棉塞的松緊程度要求塞入瓶口4到5厘米之間，提起棉塞輕輕晃動(dòng)細(xì)胞搖瓶不脫落為宜，然后再將棉塞用兩層紗布包好，紗布四角兩兩樹對(duì)系在一起，名用線縫合，再塞入細(xì)胞搖瓶?jī)?nèi)。然后外面再包四層報(bào)紙，用三根膠圈套好。 4、滅菌 將準(zhǔn)備好的細(xì)胞搖瓶放入高壓鍋內(nèi)，擰好螺栓，開始加熱，初期放汽閥打開，等到放汽閥持續(xù)穩(wěn)定排汽時(shí)關(guān)閉排汽閥，當(dāng)壓力達(dá)到0·04兆帕?xí)r將排汽閥緩緩打開排氣，壓力降至0時(shí)關(guān)閉排汽閥，當(dāng)壓力達(dá)到015以后，安全閥第一次排汽開始計(jì)時(shí)30分鐘，停止加熱，等到壓力自然降至0時(shí)打開排汽閥，擰開螺栓，將高壓鍋蓋打開三分之一，利用鍋體余熱烘干報(bào)紙水分，放到超凈工作臺(tái)上或接種箱里準(zhǔn)備接種。 5、接種 將準(zhǔn)備好的搖瓶母種與滅好菌的搖瓶培養(yǎng)基一同放入超凈工作臺(tái)或接種箱里，按常規(guī)方法消毒處理以后開始接種。接種時(shí)先將試管斷橋前端的培養(yǎng)基用酒精燈火焰消毒處理過(guò)的無(wú)菌（以下簡(jiǎn)稱無(wú)菌）接種鉤取出扔掉，然后用無(wú)功接種鏟鏟薄薄一層帶有菌絲的菌種二厘米長(zhǎng)一塊，揭開細(xì)胞搖瓶報(bào)紙，拔下棉塞，注意棉塞用左手無(wú)名指和小脂夾住，保持棉塞塞入瓶口部分朝向手脂背面，操作的過(guò)程中嚴(yán)格禁止棉塞觸碰未經(jīng)消毒的物品。用接種鉤將鏟好的菌種塊鉤入細(xì)胞搖瓶?jī)?nèi)，一定要保持菌種落入細(xì)胞搖瓶時(shí)有比絲的那一面向上，飄浮于細(xì)胞搖瓶中的液體之上。然后將棉塞經(jīng)過(guò)酒精燈火焰消毒處理以后再塞入細(xì)胞搖瓶瓶口，蓋好報(bào)紙，套上膠圈。 6、靜止培養(yǎng) 接好種以后要輕拿輕放，盡量保持平穩(wěn)，將細(xì)胞搖瓶放到25-28度的環(huán)境中閉光培養(yǎng)48-72小時(shí)，因品種不同而培養(yǎng)時(shí)間不同，每天注意檢測(cè)是否感染雜菌，如果發(fā)現(xiàn)感染即可淘汰不用。 7、搖床培養(yǎng) 已經(jīng)萌發(fā)好沒(méi)有雜菌感染的細(xì)胞搖瓶放到搖床上進(jìn)行培養(yǎng)，回旋式搖床搖出來(lái)的菌球均勻，便于檢查雜菌。根據(jù)菌種的不同回旋速度也不同，一般情況下控制在160-200次之間即可。在實(shí)際生產(chǎn)中本著先慢后快的原則進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)不同菌種的生長(zhǎng)速度調(diào)結(jié)回旋速度。 |
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