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lyfdxb鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
細(xì)胞搖瓶在液體菌種生產(chǎn)中的應(yīng)用-富道細(xì)胞
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作為一種細(xì)胞培養(yǎng)耗材,細(xì)胞搖瓶廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域,在液體菌種生產(chǎn)中也用到了細(xì)胞搖瓶,其生產(chǎn)流程如下: 1、培養(yǎng)基制備 馬鈴薯250克,洗凈削皮加水1500毫升煮至熟而不爛,四層紗布過濾取汁1000毫升,然后加入葡萄糖20克,蛋白胨2克,磷酸二氫鉀2克,硫酸鎂1克,維生素B1兩片,消泡濟0·3毫升,煮至完全溶解以后停止加熱。 2、裝瓶 將煮好的液體菌種培養(yǎng)基靜止,等待其中固態(tài)物沉淀以后取上清液裝細(xì)胞搖瓶,裝瓶的時候需要注意的是要用漏斗放到細(xì)胞搖瓶上,然后將培養(yǎng)液延漏斗倒入瓶內(nèi),防止?fàn)I養(yǎng)液粘到瓶口或接近瓶口的瓶壁上。裝入量為細(xì)胞搖瓶標(biāo)注量的60%即可。 3、制作封口棉塞 塞細(xì)胞搖瓶瓶口的棉塞的松緊程度要求塞入瓶口4到5厘米之間,提起棉塞輕輕晃動細(xì)胞搖瓶不脫落為宜,然后再將棉塞用兩層紗布包好,紗布四角兩兩樹對系在一起,名用線縫合,再塞入細(xì)胞搖瓶內(nèi)。然后外面再包四層報紙,用三根膠圈套好。 4、滅菌 將準(zhǔn)備好的細(xì)胞搖瓶放入高壓鍋內(nèi),擰好螺栓,開始加熱,初期放汽閥打開,等到放汽閥持續(xù)穩(wěn)定排汽時關(guān)閉排汽閥,當(dāng)壓力達到0·04兆帕?xí)r將排汽閥緩緩打開排氣,壓力降至0時關(guān)閉排汽閥,當(dāng)壓力達到015以后,安全閥第一次排汽開始計時30分鐘,停止加熱,等到壓力自然降至0時打開排汽閥,擰開螺栓,將高壓鍋蓋打開三分之一,利用鍋體余熱烘干報紙水分,放到超凈工作臺上或接種箱里準(zhǔn)備接種。 5、接種 將準(zhǔn)備好的搖瓶母種與滅好菌的搖瓶培養(yǎng)基一同放入超凈工作臺或接種箱里,按常規(guī)方法消毒處理以后開始接種。接種時先將試管斷橋前端的培養(yǎng)基用酒精燈火焰消毒處理過的無菌(以下簡稱無菌)接種鉤取出扔掉,然后用無功接種鏟鏟薄薄一層帶有菌絲的菌種二厘米長一塊,揭開細(xì)胞搖瓶報紙,拔下棉塞,注意棉塞用左手無名指和小脂夾住,保持棉塞塞入瓶口部分朝向手脂背面,操作的過程中嚴(yán)格禁止棉塞觸碰未經(jīng)消毒的物品。用接種鉤將鏟好的菌種塊鉤入細(xì)胞搖瓶內(nèi),一定要保持菌種落入細(xì)胞搖瓶時有比絲的那一面向上,飄浮于細(xì)胞搖瓶中的液體之上。然后將棉塞經(jīng)過酒精燈火焰消毒處理以后再塞入細(xì)胞搖瓶瓶口,蓋好報紙,套上膠圈。 6、靜止培養(yǎng) 接好種以后要輕拿輕放,盡量保持平穩(wěn),將細(xì)胞搖瓶放到25-28度的環(huán)境中閉光培養(yǎng)48-72小時,因品種不同而培養(yǎng)時間不同,每天注意檢測是否感染雜菌,如果發(fā)現(xiàn)感染即可淘汰不用。 7、搖床培養(yǎng) 已經(jīng)萌發(fā)好沒有雜菌感染的細(xì)胞搖瓶放到搖床上進行培養(yǎng),回旋式搖床搖出來的菌球均勻,便于檢查雜菌。根據(jù)菌種的不同回旋速度也不同,一般情況下控制在160-200次之間即可。在實際生產(chǎn)中本著先慢后快的原則進行培養(yǎng)。根據(jù)不同菌種的生長速度調(diào)結(jié)回旋速度。 |
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