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lyfdxb鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
細(xì)胞搖瓶在液體菌種生產(chǎn)中的應(yīng)用-富道細(xì)胞
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作為一種細(xì)胞培養(yǎng)耗材，細(xì)胞搖瓶廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域，在液體菌種生產(chǎn)中也用到了細(xì)胞搖瓶，其生產(chǎn)流程如下： 1、培養(yǎng)基制備 馬鈴薯250克，洗凈削皮加水1500毫升煮至熟而不爛，四層紗布過濾取汁1000毫升，然后加入葡萄糖20克，蛋白胨2克，磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂1克，維生素B1兩片，消泡濟0·3毫升，煮至完全溶解以后停止加熱。 2、裝瓶 將煮好的液體菌種培養(yǎng)基靜止，等待其中固態(tài)物沉淀以后取上清液裝細(xì)胞搖瓶，裝瓶的時候需要注意的是要用漏斗放到細(xì)胞搖瓶上，然后將培養(yǎng)液延漏斗倒入瓶內(nèi)，防止?fàn)I養(yǎng)液粘到瓶口或接近瓶口的瓶壁上。裝入量為細(xì)胞搖瓶標(biāo)注量的60%即可。 3、制作封口棉塞 塞細(xì)胞搖瓶瓶口的棉塞的松緊程度要求塞入瓶口4到5厘米之間，提起棉塞輕輕晃動細(xì)胞搖瓶不脫落為宜，然后再將棉塞用兩層紗布包好，紗布四角兩兩樹對系在一起，名用線縫合，再塞入細(xì)胞搖瓶內(nèi)。然后外面再包四層報紙，用三根膠圈套好。 4、滅菌 將準(zhǔn)備好的細(xì)胞搖瓶放入高壓鍋內(nèi)，擰好螺栓，開始加熱，初期放汽閥打開，等到放汽閥持續(xù)穩(wěn)定排汽時關(guān)閉排汽閥，當(dāng)壓力達到0·04兆帕?xí)r將排汽閥緩緩打開排氣，壓力降至0時關(guān)閉排汽閥，當(dāng)壓力達到015以后，安全閥第一次排汽開始計時30分鐘，停止加熱，等到壓力自然降至0時打開排汽閥，擰開螺栓，將高壓鍋蓋打開三分之一，利用鍋體余熱烘干報紙水分，放到超凈工作臺上或接種箱里準(zhǔn)備接種。 5、接種 將準(zhǔn)備好的搖瓶母種與滅好菌的搖瓶培養(yǎng)基一同放入超凈工作臺或接種箱里，按常規(guī)方法消毒處理以后開始接種。接種時先將試管斷橋前端的培養(yǎng)基用酒精燈火焰消毒處理過的無菌（以下簡稱無菌）接種鉤取出扔掉，然后用無功接種鏟鏟薄薄一層帶有菌絲的菌種二厘米長一塊，揭開細(xì)胞搖瓶報紙，拔下棉塞，注意棉塞用左手無名指和小脂夾住，保持棉塞塞入瓶口部分朝向手脂背面，操作的過程中嚴(yán)格禁止棉塞觸碰未經(jīng)消毒的物品。用接種鉤將鏟好的菌種塊鉤入細(xì)胞搖瓶內(nèi)，一定要保持菌種落入細(xì)胞搖瓶時有比絲的那一面向上，飄浮于細(xì)胞搖瓶中的液體之上。然后將棉塞經(jīng)過酒精燈火焰消毒處理以后再塞入細(xì)胞搖瓶瓶口，蓋好報紙，套上膠圈。 6、靜止培養(yǎng) 接好種以后要輕拿輕放，盡量保持平穩(wěn)，將細(xì)胞搖瓶放到25-28度的環(huán)境中閉光培養(yǎng)48-72小時，因品種不同而培養(yǎng)時間不同，每天注意檢測是否感染雜菌，如果發(fā)現(xiàn)感染即可淘汰不用。 7、搖床培養(yǎng) 已經(jīng)萌發(fā)好沒有雜菌感染的細(xì)胞搖瓶放到搖床上進行培養(yǎng)，回旋式搖床搖出來的菌球均勻，便于檢查雜菌。根據(jù)菌種的不同回旋速度也不同，一般情況下控制在160-200次之間即可。在實際生產(chǎn)中本著先慢后快的原則進行培養(yǎng)。根據(jù)不同菌種的生長速度調(diào)結(jié)回旋速度。 |
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