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細(xì)胞鋪板實(shí)驗(yàn)操作技巧
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做細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞鋪板大概是常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn)。但是有很多人不是很得要領(lǐng)，鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。怎么辦呢？以下來(lái)自豐壽技術(shù)人員詳細(xì)解析，請(qǐng)收好了！ 一般96孔板，每孔是加100微升細(xì)胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入，加完半邊板后，將未加的細(xì)胞懸液混一下再繼續(xù)加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆，將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)（逆時(shí)針效果不好），依次敲擊剩余三個(gè)邊，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱。 6孔板、12孔板或24孔板，均可采用將個(gè)孔加入少量無(wú)血清培養(yǎng)基，晃動(dòng)浸潤(rùn)整個(gè)孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤(rùn)孔底，其它孔一次類推，這樣整個(gè)孔底都是濕潤(rùn)的，細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底，加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間，中間細(xì)胞多，而加在周邊晃勻后會(huì)出現(xiàn)周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象，細(xì)胞分散較均勻，注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。 細(xì)胞懸液加完后，將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高，對(duì)著燈光，從底部往上看，看細(xì)胞有沒(méi)有抱團(tuán)。然后從底部敲擊，使之分散。如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話，建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下，效果不錯(cuò)，振幅小，頻率高。 細(xì)胞要盡量打散，大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后，要充分懸浮。還有轉(zhuǎn)移到六孔板后，需要晃動(dòng)，晃的時(shí)候不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈，不然細(xì)胞就全被帶到中間去了，就會(huì)不均勻。 一瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿后，正常處理，在培養(yǎng)瓶里吹勻，然后鋪6孔板，每孔2毫升，鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭，然后放到培養(yǎng)箱里，輕微的左右前后各三圈�；旧�24小時(shí)之后再觀察，每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻。 計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量，混勻后，加到六孔板里，六孔板按橫8字型晃，顯微鏡下觀察，如果不均勻，按上述方法再晃。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話，在種六孔板的過(guò)程中，隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子。 放在水平板面上先上下移動(dòng)，再左右移動(dòng)，每個(gè)方向5到6次，但關(guān)鍵的是搖晃后直接放入培養(yǎng)箱中，不要再做過(guò)多的運(yùn)動(dòng)，例如放到鏡下去看，否則很容易就又聚到中間去了。 公眾號(hào)：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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