 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 526 | 回復: 0 | |||
[交流]
細胞實驗 | 脂肪組織中分離巨噬細胞
|
|
01、分離 •用PBS清洗脂肪組織，并將組織放在冰上的培養(yǎng)皿中，用剪刀將組織切成小塊（約3-5mm）。 •將切碎的組織轉移到含有7ml冰冷消化緩沖液的10ml圓底管中，此操作需一直保持在冰上。對于>1g的脂肪，將組織切碎并轉移到含有10ml冰冷消化緩沖液的50ml錐形管中。 •加入1ml（如脂肪組織重量>1g則可以增加至1.5ml）10× 膠原酶緩沖液，并加入消化緩沖液使得膠原酶的最終濃度為1mg/ml。 •在37°C下孵育半小時，且使試管劇烈搖晃。每10分鐘大力搖動試管，可獲得更高的細胞產量。30分鐘后，取10µl產物進行顯微鏡觀察，此時，脂肪細胞應顯示為大的單細胞，白細胞和其他基質細胞會小得多。如果白細胞仍附著在脂肪細胞上，則應繼續(xù)消化；如果沒有，請繼續(xù)下一步。 •消化后，將EDTA添加到10 mM的最終濃度，并在37°C下再孵育10分鐘。 02、過濾 •用 PBS預濕100 µm尼龍過濾器，然后放置在50ml錐形管上。使用移液管，將前述樣本的細胞沉淀先轉移到過濾器上過濾，然后再過濾含有脂肪細胞的上層。 •加入10 ml FACS 緩沖液輕輕清洗過濾器兩次。 03、離心 •在4 °C下以500×g 離心10分鐘以分離脂肪細胞和巨噬細胞。離心后，脂肪細胞在頂部形成白色層，而巨噬細胞等其它細胞在管底部形成紅色或白色沉淀。 •輕輕吸出并丟棄脂肪細胞和上清液。此時，含有巨噬細胞的團塊很容易受到干擾，因此應格外小心。 04、獲取巨噬細胞 •通過輕彈試管將沉淀重懸于0.5 ml紅細胞裂解液中。在室溫下孵育5分鐘，偶爾輕輕搖晃。 •通過添加5 ml FACS緩沖液，中和紅細胞裂解作用。 •在4 °C下以500×g 離心10分鐘。 •在3–5 ml FACS緩沖液中重懸細胞沉淀并在冰上孵育。 05、巨噬細胞計數 •將10 µl每個樣品1:1與臺盼藍溶液混合。使用血細胞計數板仔細計數活細胞。根據計數得到的細胞數量，結合獲得的樣本總體積，可計算出每份脂肪組織巨噬細胞產量。典型的產量：瘦小鼠一般為1-3×1000000個細胞/g脂肪，肥胖小鼠一般為2-5×1000000個細胞/g脂肪。 |
回復此樓» 猜你喜歡
求調劑
已經有3人回復
-
A區(qū)一本交叉課題組，低分調劑，招收機械電子信息通信等交叉方向
已經有20人回復
-
334求調劑
已經有5人回復
-
085600材料與化工，一志愿廣州985，求調劑
已經有4人回復
-
334求調劑
已經有4人回復
-
紡織、生物、化學、材料等專業(yè)
已經有7人回復
-
材料學學碩308分/本科東北大學/一志愿西北工業(yè)大學/
已經有8人回復
-
0856材料與化工求調劑！
已經有8人回復
-
一志愿武理085601專碩347分求調劑
已經有4人回復
-
招調劑
已經有6人回復
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 科研小努力 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 接收調劑 +18 | 津萌津萌 2026-03-02 | 27/1350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工304求調劑 +3 | 邱gl 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 271求調劑 +3 | 月色c 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料調劑 +3 | ounce. 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 298 調劑 +9 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 化學工程求調劑 +10 | 化工人999 2026-03-04 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 320材料與化工，求調劑 +6 | 鶴遨予卿 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿中石油，化學工程，301求調劑 +3 | 豚饅枳枳 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
材料325求調劑
 30+5
|
mariusuki 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085700資環(huán)求調劑，初始279，六級已過，英語能力強 +3 | 085700資環(huán)調劑 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290求調劑 +9 | ErMiao1020 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 267求調劑 +6 | 釣魚佬as 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 290分材料工程085601求調劑 數二英一 +8 | llx0610 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856求調劑285 +11 | 呂仔龍 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考博] 博士自薦 +4 | kkluvs 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料調劑 +3 | 恒順自然 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856化工專碩求調劑 +15 | 董boxing 2026-03-01 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 材料學調劑 +10 | 提神豆沙包 2026-02-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 307求調劑 +4 | 73372112 2026-02-28 | 6/300 |
|