 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 444 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（紅色熒光）實驗步驟
|
|
一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（紅色熒光）實驗步驟 自備儀器耗材： 1)試劑 PBS（含1%BSA） 緩沖液( pH7.2～7.4)， 目的是減少離心造成的細(xì)胞損失。 2)儀器 流式細(xì)胞儀、離心機。 對照設(shè)置： 陰性對照：排除細(xì)胞本底、藥物處理等原因產(chǎn)生熒光背景以及非特異性染色造成的影響。準(zhǔn)備一組細(xì)胞作為陰性對照， 第8步標(biāo)記工作液配制時不添加TdT酶，其余操作與實驗組相同。 實驗步驟 1.收集細(xì)胞并進行計數(shù)，每組取1×106個細(xì)胞，300×g離心5min，棄上清。 注：若樣本為貼壁細(xì)胞，凋亡細(xì)胞會有部分懸浮于上清中，上清中的細(xì)胞也要收集。 2.加入200μLPBS（含1%BSA）重懸細(xì)胞，加入200uL Fixation Buffer，室溫固定60min（推薦使用搖轉(zhuǎn)方式，或每15min 混勻一次）。 3.加入1mL PBS（含1%BSA），600×g 離心5min，棄上清。 4.加入200uL Permeabilization Buffer，冰上破膜10min。 注：破膜溫度過高或者時間過久會導(dǎo)致細(xì)胞破碎，因此建議Permeabilization Buffer解凍后放置在4℃ , 待使用前取出 ; 另外破膜時間最長不要超過15min。 5.加入1-2mL PBS（含1%BSA）終止破膜，輕輕吹打混勻后，600×g離心5min，棄上清。 6.加入200uL TdT Equilibration Buffer，輕輕吹打混勻，37 °C 平衡15min。 7.600×g離心5min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀。 8.按照分組參考下表配制標(biāo)記工作液，每個樣本加入100uL反應(yīng)液（充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用）。 組分 檢測樣本 陰性對照 TdT Equilibration Buffer 70ul 80ul Labeling Solution 20ul 20ul TdT Enzyme 10ul 0ul 注： ①TdT Equilibration Buffer使用前，室溫靜置直至完全溶解。冰凍的平衡液融化后可能會出現(xiàn)鈷鹽結(jié)晶，此為正�，F(xiàn) 象。使用前渦旋混勻。 ②Labeling Solution使用前，請置于冰上溶解，待完全溶解后離心，用槍頭吹打混勻。 ③TdT酶對溫度較敏感，請嚴(yán)格保存于-20℃ , 使用前取出，使用后立即放回。 ④配制標(biāo)記工作液時，建議不要渦旋。 9.37℃避光孵育60min（每20min輕輕搖晃混勻細(xì)胞） 。 10.加入1mL Stop Solution輕輕吹打混勻，室溫靜置5min，加入300 500uL PBS(含1%BSA)，600×g 離心5min，棄上清。 11.加入200uL PBS（含1%BSA）重懸細(xì)胞，上機檢測。 (為避免熒光淬滅，請盡快上機檢測) 注意事項： 1.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅。 2.為了您的安全和健康，操作時必須戴口罩、手套、實驗服和其它生化實驗室防護措施。。 3.用于該試劑盒的檢測樣本最低細(xì)胞數(shù)目不低于5×105個。 4.實驗中需要重懸細(xì)胞的步驟，用移液器輕輕吹打細(xì)胞10-20次，吹打時請勿將槍頭中的液體完全吹出，避免造成細(xì)胞損 傷和產(chǎn)生過多的氣泡。 5.離心去上清的操作要小心謹(jǐn)慎，避免造成細(xì)胞損失。 6.Labeling Solution 和TdT酶應(yīng)避免反復(fù)凍融和渦旋操作。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有55人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 湖北普美生物科?/a> 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[碩博家園] 售SCI文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4 +3 | 7mzg0e04z2 2026-03-06 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 +4 | vs9ky3szrj 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0307化學(xué)求調(diào)劑 +5 | 0ok0k 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[找工作] 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 +4 | ipys00zm58 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 呼呼？~+123456 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +7 | 呼呼？~+123456 2026-03-05 | 10/500 |
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +3 | 林小星發(fā)大財 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +6 | Trying] 2026-03-05 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 083000，總分284，求調(diào)劑 +3 | 徐yr 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +4 | berdmond 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | 曼殊2266 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +6 | 啊歐歐歐 2026-03-03 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 376求調(diào)劑 +3 | 王浩然sam 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 320材料與化工，求調(diào)劑 +6 | 鶴遨予卿 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑，總分320分，一志愿中南民族大學(xué) +3 | 19286712440 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0855機械工程324求調(diào)劑 +3 | 鄭SK 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料專碩346求調(diào)劑 +3 | 旺一下 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +4 | Afy123456 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +9 | 材紫有化 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 化工299分求調(diào)劑 一志愿985落榜 +5 | 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 | 5/250 |
|