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科研小努力新蟲 (小有名氣)
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[交流]
影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染的因素
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1、血清：血清影響復(fù)合物的形成，降低轉(zhuǎn)染效率。 陽離子脂質(zhì)體和DNA的最佳量在使用血清時(shí)會(huì)有所不同，因此想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清時(shí)要進(jìn)行條件優(yōu)化。大部分細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個(gè)小時(shí)內(nèi)保持健康。 2、抗生素：比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些抗生素一般對(duì)于真核細(xì)胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。 3、細(xì)胞代數(shù)：轉(zhuǎn)染前細(xì)胞最好經(jīng)過1-2次傳代保證細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛容易轉(zhuǎn)染，注意貼壁細(xì)胞一旦長(zhǎng)滿就不好轉(zhuǎn)染。 4、細(xì)胞鋪板密度：一般轉(zhuǎn)染時(shí)，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為2*10^6--4*10^6 細(xì)胞/ml 時(shí)效果較好。確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長(zhǎng)滿或處于靜止期。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。 5、DNA質(zhì)量：DNA質(zhì)量對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成和轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。 |
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