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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 綜合其他 » PCR新手必看
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PCR新手必看
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最近學習定量PCR和數(shù)字PCR，然后就遇到各種PCR技術(shù)，PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和ddPCR，有幾個長得好像，怎么區(qū)分呢？今天一舉搞定它。 01、普通PCR PCR是普通PCR，以雙鏈DNA為模板，以dNTP為底物，特異性地擴增雙鏈DNA。然后采用瓊脂糖凝膠電泳對產(chǎn)物進行檢測，只能做定性分析。 02、實時熒光定量PCR qPCR和Real-time PCR是實時熒光定量PCR，以cDNA為模板，以dNTP為底物，對擴增出的DNA進行定量分析。實時熒光定量PCR常用的方法：水解探針法和熒光染料法。 03、逆轉(zhuǎn)錄PCR RT-PCR 是逆轉(zhuǎn)錄PCR，采用 Oligo（dT） 或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，再以 cDNA 為模板進行 PCR 擴增，結(jié)果只能定性，不能定量。 04、實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR RT-qPCR是實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR，是qPCR+RT-PCR的組合，將總RNA或mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后再作為模板，以dNTP為底物，進行qPCR的定量分析。 05、數(shù)字PCR dPCR是數(shù)字PCR即三代PCR，是一種能夠?qū)崿F(xiàn)核酸絕對定量的精準檢測技術(shù)，基于泊松分布原理將核酸樣品分配到大量獨立、平行的微反應單元（納升級）中，使每個反應室中平均只有一個拷貝或者沒有目標DNA分子，然后加入熒光信號進行擴增，從而實現(xiàn)靶標核酸分子的絕對計數(shù)，提高檢測靈敏度和準確度。 Q 各種PCR的全稱 A: ① 聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR） ②實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR） ③ 逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR） ④實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（Real-time RT-PCR，RT-qPCR） 數(shù)字PCR（Digital PCR，Dig-PCR，dPCR） |
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