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使用環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒，請問影響實驗結(jié)果的因素？ 已有1人參與
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使用環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒，檢測出樣品對COX-2的抑制率達100%以上，請問影響該結(jié)果的因素？樣品濃度是否會對結(jié)果有影響？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒是一種利用熒光檢測，簡單、快速、靈敏地用于人COX-2抑制劑高通量篩選的試劑盒。但其同時存在影響因素多的不足，現(xiàn)就實驗操作中常見的影響因素進行分析實驗，以提高的實驗質(zhì)量。 樣品 樣品是檢測的前提，樣品質(zhì)量會直接影響實驗結(jié)果�？梢杂迷噭┖衼頇z測的樣品很多，需要注意的是，不同的待測樣本中的待測蛋白濃度分布可能有所不同，因此在進行實驗時，需要根據(jù)實際情況進行適當?shù)南♂尯驼{(diào)整，以確保在試劑盒的線性范圍內(nèi)進行檢測。如果濃度過大，吸光度值過高，計算出的結(jié)果將有可能出現(xiàn)偏差。還應(yīng)注意樣品的pH值在7-8之間，或者確保加入樣品后反應(yīng)體系的pH值在7-8之間，否則會影響COX-2 Probe的穩(wěn)定性和熒光值。 溫度 溫度主要影響抗原抗體反應(yīng)，酶促反應(yīng)速度及非特異性吸附，溫度升高可使抗原抗體結(jié)合反應(yīng)加速，但也易引起抗原抗體復(fù)合物的解離。酶促反應(yīng)速度同樣隨溫度升高而增快，但是酶蛋白變性也加快，喪失酶學(xué)活性，降低酶的有效濃度而減慢反應(yīng)速度，溫度低時以前者為主，高時以后者為主。 需要注意的是COX-2 Probe和COX-2 Assay Buffer需要完全解凍并回復(fù)至室溫后再使用，否則會影響檢測結(jié)果。rhCOX-2使用時應(yīng)在冰上進行。使用完畢后各試劑應(yīng)立即按照試劑盒要求的條件保存。COX-2 Substrate容易被氧化，請盡量避免長時間與空氣接觸。且在使用和儲存過程中請注意保持低溫，否則其穩(wěn)定性可能會受到影響。 時間、人員操作 在溫度保證的前提下，時間的控制至關(guān)重要，尤其是底物顯色的時間控制，顯色時間不足或過長會導(dǎo)致實驗不成立，無法對檢測結(jié)果進行判斷。 加人標本、試劑及混合的時間稱為操作時差。操作時差在每個試驗中都存在，對結(jié)果或多或少有影響。對手工操作，尤其是樣品量大的項目，從加人第一個標本到最后一個標本，需幾十分鐘，加人試劑及混勻存在很大的時間差異，使抗原抗體和酶促反應(yīng)時間不一致，易產(chǎn)生假陽性、假陰性結(jié)果。 因此，樣品過多時，請選擇分批操作，對勿須更換移液口吸嘴的酶結(jié)合物，底物的加樣可選擇8聯(lián)或12聯(lián)專用的多道加液器。亦可避免單孔滴加底物時遺漏多加。 |
2樓2023-08-31 18:26:24
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