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yyyllnwei新蟲(chóng) (初入文壇)
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使用環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒，請(qǐng)問(wèn)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素？ 已有1人參與
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使用環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒，檢測(cè)出樣品對(duì)COX-2的抑制率達(dá)100%以上，請(qǐng)問(wèn)影響該結(jié)果的因素？樣品濃度是否會(huì)對(duì)結(jié)果有影響？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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鯊魚(yú)沒(méi)丫丫
新蟲(chóng) (初入文壇)
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒是一種利用熒光檢測(cè)，簡(jiǎn)單、快速、靈敏地用于人COX-2抑制劑高通量篩選的試劑盒。但其同時(shí)存在影響因素多的不足，現(xiàn)就實(shí)驗(yàn)操作中常見(jiàn)的影響因素進(jìn)行分析實(shí)驗(yàn)，以提高的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。 樣品 樣品是檢測(cè)的前提，樣品質(zhì)量會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。可以用試劑盒來(lái)檢測(cè)的樣品很多，需要注意的是，不同的待測(cè)樣本中的待測(cè)蛋白濃度分布可能有所不同，因此在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯驼{(diào)整，以確保在試劑盒的線性范圍內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。如果濃度過(guò)大，吸光度值過(guò)高，計(jì)算出的結(jié)果將有可能出現(xiàn)偏差。還應(yīng)注意樣品的pH值在7-8之間，或者確保加入樣品后反應(yīng)體系的pH值在7-8之間，否則會(huì)影響COX-2 Probe的穩(wěn)定性和熒光值。 溫度 溫度主要影響抗原抗體反應(yīng)，酶促反應(yīng)速度及非特異性吸附，溫度升高可使抗原抗體結(jié)合反應(yīng)加速，但也易引起抗原抗體復(fù)合物的解離。酶促反應(yīng)速度同樣隨溫度升高而增快，但是酶蛋白變性也加快，喪失酶學(xué)活性，降低酶的有效濃度而減慢反應(yīng)速度，溫度低時(shí)以前者為主，高時(shí)以后者為主。 需要注意的是COX-2 Probe和COX-2 Assay Buffer需要完全解凍并回復(fù)至室溫后再使用，否則會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。rhCOX-2使用時(shí)應(yīng)在冰上進(jìn)行。使用完畢后各試劑應(yīng)立即按照試劑盒要求的條件保存。COX-2 Substrate容易被氧化，請(qǐng)盡量避免長(zhǎng)時(shí)間與空氣接觸。且在使用和儲(chǔ)存過(guò)程中請(qǐng)注意保持低溫，否則其穩(wěn)定性可能會(huì)受到影響。 時(shí)間、人員操作 在溫度保證的前提下，時(shí)間的控制至關(guān)重要，尤其是底物顯色的時(shí)間控制，顯色時(shí)間不足或過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)不成立，無(wú)法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷。 加人標(biāo)本、試劑及混合的時(shí)間稱(chēng)為操作時(shí)差。操作時(shí)差在每個(gè)試驗(yàn)中都存在，對(duì)結(jié)果或多或少有影響。對(duì)手工操作，尤其是樣品量大的項(xiàng)目，從加人第一個(gè)標(biāo)本到最后一個(gè)標(biāo)本，需幾十分鐘，加人試劑及混勻存在很大的時(shí)間差異，使抗原抗體和酶促反應(yīng)時(shí)間不一致，易產(chǎn)生假陽(yáng)性、假陰性結(jié)果。 因此，樣品過(guò)多時(shí)，請(qǐng)選擇分批操作，對(duì)勿須更換移液口吸嘴的酶結(jié)合物，底物的加樣可選擇8聯(lián)或12聯(lián)專(zhuān)用的多道加液器。亦可避免單孔滴加底物時(shí)遺漏多加。 |
2樓2023-08-31 18:26:24
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