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密度梯度離心無法分離純化蛋白怎么辦 已有1人參與
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密度分離液用的是60%的optiprep,hepes做稀釋液,梯度是15%,25%,35%,45%,手動(dòng)制備,槍頭一滴一滴加,每層2.8ml,樣品600-1000 ul,制備密度梯度的時(shí)候肉眼可見分層,但最下面的分界線有些彌散,且液體自己會產(chǎn)生氣泡(查了資料說是hepes見光易氧化),離心6h,轉(zhuǎn)速41000r,每次離心后密度層分界線不清楚,按照加樣體積取密度液,wb驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)各個(gè)密度層均有目的蛋白(文獻(xiàn)說只在28-31%這兩層)抗體是對抗,但之前其他實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行過這一步,用的抗體和這個(gè)一樣,能分離并且鑒定出來,所以想求職大家問問怎么回事 另外,文獻(xiàn)中的梯度是25-40%,每個(gè)梯度間隔為3%,我試過,但是打不出來分界線,,很容易就混到一起,也想問下這個(gè),希望有相關(guān)方面的同學(xué)給我一些幫助,謝謝大家 @天使托 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
銅蟲 (小有名氣)
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